बैक्टीरियोलॉजिकल अध्ययन. संक्रामक रोगों के निदान के लिए बैक्टीरियोलॉजिकल अनुसंधान बैक्टीरियोलॉजिकल विधि

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बैक्टीरियोलॉजिकल अध्ययन

बैक्टीरियोलॉजिकल अनुसंधान- सूक्ष्मजीवविज्ञानी निदान करने के लिए बैक्टीरिया को अलग करने और उनके गुणों का अध्ययन करने का इरादा है।
परीक्षण सामग्री को सड़न रोकने वाली परिस्थितियों में बाँझ कंटेनरों में एकत्र किया जाना चाहिए और जितनी जल्दी हो सके प्रयोगशाला में पहुंचाया जाना चाहिए। यदि आवश्यक हो, तो नमूनों को प्रशीतित संग्रहित किया जाना चाहिए। नमूना लेने की तकनीक वस्तु, रोग की प्रकृति और सूक्ष्मजीव के गुणों पर निर्भर करती है। बैक्टीरियोलॉजिकल अनुसंधान के सामान्य तरीकों में से एक बैक्टीरियोस्कोपी है।
अपरिवर्तित बैक्टीरिया का अध्ययन करने के लिए, दो तरीकों का उपयोग किया जाता है: एक कुचली हुई बूंद (स्लाइड और कवर ग्लास के बीच) और एक लटकती हुई बूंद। यह याद रखना चाहिए कि अपरिवर्तित बैक्टीरिया की तैयारी संक्रामक होती है।
बैक्टीरियोलॉजिकल अनुसंधान के सबसे महत्वपूर्ण तत्वों में बैक्टीरियल लूप या पाश्चर पिपेट के साथ किए गए बैक्टीरियल संस्कृतियों का टीकाकरण और उपसंस्कृति शामिल है। लूप को एक लौ में एनीलिंग करके निष्फल किया जाता है, फिर इसे असंक्रमित अगर के एक क्षेत्र को छूकर या एक बाँझ तरल में धोकर ठंडा किया जाता है। पाश्चर पिपेट का उपयोग करते समय, चिमटी से टिप को तोड़ दें, पिपेट को बर्नर की लौ से कई बार गुजारें और इसे ठंडा होने दें। बुआई करते समय तरल और ठोस पोषक माध्यम का उपयोग किया जाता है। जब तिरछे अगर पर बोया जाता है, तो जीवाणु संस्कृति को अगर की सतह पर एक लूप के साथ रगड़ा जाता है। अगर या जिलेटिन कॉलम की मोटाई में बुआई करते समय, पोषक माध्यम को एक लूप या एक विशेष सुई के साथ ट्यूब के नीचे तक छेद दिया जाता है। तरल माध्यम में बुआई करते समय, यह सुनिश्चित करने के लिए सावधानी बरतनी चाहिए कि तरल बाहर न गिरे और नलियों और स्टॉपर्स के किनारों को गीला न कर दे। टीकाकरण और उपसंस्कृति गैस बर्नर की लौ के पास की जानी चाहिए, परीक्षण ट्यूब लंबे समय तक खुली नहीं रहनी चाहिए, संस्कृति के साथ लूप या पाश्चर पिपेट को कुछ भी नहीं छूना चाहिए; टेस्ट ट्यूब को बंद करने से पहले किनारों को जला देना चाहिए। टीकाकरण ट्यूबों को तुरंत लेबल किया जाना चाहिए।

सूक्ष्मजीवविज्ञानी अनुसंधान विधियों को विभाजित किया गया हैरोगी के शरीर में रोगजनकों का प्रत्यक्ष पता लगाने के तरीके - बैक्टीरियोस्कोपिक और बैक्टीरियोलॉजिकल अध्ययन; रोगी के शरीर में रोगज़नक़ की उपस्थिति के अप्रत्यक्ष साक्ष्य के तरीके - सीरोलॉजिकल अध्ययन जिसका उद्देश्य संक्रमित सामग्री में विशिष्ट एंटीजन या रक्त सीरम में एंटीबॉडी और रोगी के शरीर के विभिन्न स्रावों का पता लगाना है।
रोगज़नक़ की उपस्थिति के लिए रक्त, मूत्र, मस्तिष्कमेरु द्रव, गले और नाक से बलगम, मल और विभिन्न रोग संबंधी सब्सट्रेट्स की बैक्टीरियोस्कोपिक जांच का उपयोग कई संक्रामक रोगों के लिए किया जाता है। इस पद्धति के अनुप्रयोग सीमित हैं, हालाँकि यह बहुत महत्वपूर्ण है। इसका उपयोग, विशेष रूप से, मलेरिया, पुनरावर्ती बुखार और रक्त में लेप्टोस्पायरोसिस के रोगजनकों का पता लगाने के लिए किया जाता है। सेरेब्रोस्पाइनल द्रव की जांच प्युलुलेंट और ट्यूबरकुलस मेनिनजाइटिस के लिए की जाती है, गले और नाक से बलगम - डिप्थीरिया, विंसेंट एनजाइना के लिए, मल - अमीबियासिस, बैलेंटिडियासिस, जिआर्डियासिस के लिए; मूत्र - लेप्टोस्पायरोसिस के लिए। प्लेग और एंथ्रेक्स बेसिली को प्लेग बुबो के बिंदु और एंथ्रेक्स कार्बुनकल से लिए गए छाप स्मीयरों में देखा जा सकता है; अस्थि मज्जा और प्लीहा से एक पंचर स्मीयर की माइक्रोस्कोपी, एक अल्सर से कणिकायन लीशमैनिया का पता लगा सकता है; थूक में - माइकोबैक्टीरियम ट्यूबरकुलोसिस। बैक्टीरियोस्कोपिक विधि का लाभ इसकी गति है। विश्लेषण के परिणाम कुछ ही घंटों में प्राप्त किए जा सकते हैं। कुछ बीमारियों (मलेरिया, महामारी सेरेब्रोस्पाइनल मेनिनजाइटिस, आदि) में, बीमारी के पहले दिन से ही रोगी के शरीर में रोगजनकों का पता लगाया जा सकता है, जो समय पर निदान और उपचार के लिए बहुत महत्वपूर्ण है। फ्लोरोक्रोमेस (इम्यूनोफ्लोरेसेंस विधि) या एंजाइम (एंजाइम इम्यूनोएसे विधि) के साथ लेबल किए गए किसी दिए गए रोगज़नक़ के एंटीबॉडी युक्त विशिष्ट सीरा के साथ तैयारी के उपचार के कारण बैक्टीरियोस्कोपिक निदान की संभावनाओं में काफी विस्तार हुआ है। इस मामले में, लेबल किए गए एंटीबॉडी को एक एंटीजन के साथ जोड़ा जाता है, जिसे एक फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोप के तहत इम्यूनोफ्लोरेसेंट विधि का उपयोग करके पता लगाया जाता है, और एंजाइम इम्यूनोएसे विधि के साथ - एक सब्सट्रेट-संकेतक मिश्रण की शुरूआत के बाद एंजाइमेटिक प्रतिक्रिया उत्पाद को धुंधला करके।
बैक्टीरियोलॉजिकल डायग्नोस्टिक विधि रोगी के रक्त, मस्तिष्कमेरु द्रव, थूक, गले और नाक से बलगम, मल, मूत्र, पित्त से रोगज़नक़ को अलग करने और मृत्यु के मामले में - टीका लगाए गए अंगों के टुकड़ों से अलग करने पर आधारित है। विशेष पोषक माध्यम पर. डिप्थीरिया बैक्टीरिया के लिए गले और नाक से बलगम का अध्ययन करने, रोगी के मल से आंतों के संक्रमण (उदाहरण के लिए, हैजा, पेचिश, साल्मोनेलोसिस, एस्चेरिचियोसिस) के रोगजनकों को अलग करने, थूक से निमोनिया के रोगजनकों और अन्य मामलों में बैक्टीरियोलॉजिकल डायग्नोस्टिक्स का व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है। . इस मामले में, संदिग्ध संक्रमण की विशेषताओं, रोगज़नक़ के चयनात्मक स्थानीयकरण का स्थान और पर्यावरण में इसकी रिहाई के मार्गों को ध्यान में रखा जाता है। अध्ययन बीमारी के पहले घंटों या दिनों में ही सकारात्मक परिणाम देता है। हालाँकि, प्रयोगशाला अधिकांश संक्रामक रोगों के लिए अंतिम उत्तर केवल 2-4 दिनों के बाद और ब्रुसेलोसिस और तपेदिक के लिए - 3-4 सप्ताह के बाद रिपोर्ट करती है। यह सूक्ष्मजीवों की वृद्धि और उनकी पहचान (जैव रासायनिक और सीरोलॉजिकल) के लिए आवश्यक समय पर निर्भर करता है। प्रत्येक सूक्ष्म जीव को अपनी वृद्धि के लिए उपयुक्त पोषक माध्यम की आवश्यकता होती है। इस पर निर्भर करते हुए कि किस सूक्ष्म जीव को अलग किया जाना चाहिए (जो रोगी की नैदानिक ​​​​और महामारी विज्ञान परीक्षा के दौरान निर्धारित किया जाता है), उपयुक्त पोषक माध्यम का चयन किया जाता है। कभी-कभी कई पोषक माध्यमों पर एक साथ बुआई की जाती है। बैक्टीरियोलॉजिकल अध्ययन के परिणामों का मूल्य काफी हद तक इस बात से निर्धारित होता है कि क्या सामग्री रोगी से सही ढंग से ली गई है और क्या इसे प्रयोगशाला में सही ढंग से पहुंचाया गया है। सड़न रोकनेवाला नियमों का पालन करते हुए संक्रामक सामग्री को बाँझ कंटेनरों में एकत्र किया जाता है।

बैक्टीरियोलॉजिकल अनुसंधान का सबसे महत्वपूर्ण चरण पहचान है- शुद्ध कल्चर के रूप में प्राप्त जीवाणुओं की प्रजाति या प्रकार का निर्धारण। बैक्टीरिया की पहचान करते समय उनके शारीरिक और जैव रासायनिक गुणों और विष निर्माण का अध्ययन किया जाता है। बैक्टीरिया की पहचान के लिए सीरोलॉजिकल तरीकों का व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है। कई मामलों में, सूक्ष्मजीवों की पहचान के लिए एक जैविक विधि प्रभावी होती है, जो अध्ययन की जा रही सामग्री या परिणामी जीवाणु संस्कृति के साथ प्रयोगशाला जानवरों को संक्रमित करने और जानवरों में विशिष्ट रोग संबंधी परिवर्तनों की पहचान करने पर आधारित होती है।
शुद्ध संस्कृतियों को अलग करने के लिए यांत्रिक और जैविक तरीकों का उपयोग किया जाता है। यांत्रिक विधि का एक उदाहरण: परीक्षण सामग्री की एक बूंद को पहले, दूसरे और तीसरे पेट्री डिश में क्रमिक रूप से घने पोषक माध्यम की सतह पर एक ही बाँझ स्पैटुला या जीवाणु लूप के साथ जमीन पर रखा जाता है। एक शुद्ध संस्कृति का अलगाव विकसित व्यक्तिगत कॉलोनियों से किया जाता है और इसमें ताजा पोषक माध्यम पर उनकी जांच और स्क्रीनिंग शामिल होती है। शुद्ध संस्कृतियों को अलग करने की जैविक विधियाँ पृथक सूक्ष्म जीव की एक या दूसरी संपत्ति को ध्यान में रखने पर आधारित होती हैं, जो इसे अध्ययन के तहत सामग्री में पाए जाने वाले अन्य रोगाणुओं से अलग करती है।
जैविक विधि इस प्रकार के पोषक मीडिया का उपयोग करती है जिसमें ऐसी स्थितियाँ बनाई जाती हैं जो एक निश्चित प्रकार के सूक्ष्म जीव के विकास के लिए अनुकूल होती हैं। जैविक तरीकों में प्रयोगशाला जानवरों का संक्रमण भी शामिल है जो बैक्टीरिया की पृथक प्रजातियों के प्रति संवेदनशील होते हैं।
बैक्टीरियोलॉजिकल अनुसंधान किसी रोगी, वाहक या पर्यावरणीय वस्तुओं पर रोगजनक सूक्ष्मजीवों की पहचान करने के तरीकों का एक सेट है।

शुद्ध संस्कृति का अलगाव;

रोगियों की अधिक विस्तृत जांच, सूजन प्रक्रिया के एटियोलॉजिकल कारक की स्थापना, तर्कसंगत चिकित्सा निर्धारित करने और इसकी प्रभावशीलता निर्धारित करने के लिए बैक्टीरियोलॉजिकल अनुसंधान के तरीकों को तेजी से अभ्यास में पेश किया जा रहा है।

नैदानिक ​​सामग्री की विविधता और व्यक्तिगत अंगों के माइक्रोफ्लोरा की विशिष्टता बैक्टीरियोलॉजिकल अनुसंधान विधियों की विशेषताओं को निर्धारित करती है, जिसके लिए विशेष नमूनाकरण तकनीकों, पोषक तत्व मीडिया पर टीकाकरण और विश्लेषण की आवश्यकता होती है।

नैदानिक ​​सामग्री की बैक्टीरियोलॉजिकल जांच में कई चरण होते हैं:

अनुसंधान के लिए नमूनाकरण;

पोषक माध्यम पर बुआई;

शुद्ध संस्कृति का अलगाव;

पृथक सूक्ष्मजीव संस्कृतियों की पहचान और विभेदन;

शोध परिणामों का विश्लेषण।

बैक्टीरियोलॉजिकल जांच के दौरान, रोगी से एकत्रित सामग्री की तथाकथित बुआई पोषक मीडिया पर की जाती है, जो रोग के प्रेरक एजेंट के विकास और प्रजनन को बढ़ावा देती है। अध्ययन के दौरान, न केवल उपस्थिति के तथ्य की पहचान करना संभव है, बल्कि एक विशेष बायोमटेरियल में रोगजनक सूक्ष्मजीवों की एकाग्रता भी संभव है।
बैक्टीरियोलॉजिकल जांच की विधि में रोगी के थूक, मस्तिष्कमेरु द्रव, रक्त, साथ ही जननांगों, मौखिक गुहा, ग्रसनी और घावों से स्राव की जांच की जाती है। इस प्रकार, सूक्ष्मजीवों को मानव शरीर के लगभग किसी भी हिस्से से बोया जा सकता है।
बैक्टीरिया और कवक के प्रकार का पता लगाने और निर्धारित करने के लिए बैक्टीरियोलॉजिकल कल्चर तकनीक बेहद सुविधाजनक और प्रभावी है। वायरस का पता लगाना उनकी जीवविज्ञान की विशिष्टताओं के कारण एक निश्चित कठिनाई प्रस्तुत करता है।
न केवल विशिष्ट प्रकार के सूक्ष्मजीव का निर्धारण करने के लिए, बल्कि किसी विशेष एंटीबायोटिक की संवेदनशीलता की डिग्री स्थापित करने के लिए भी बैक्टीरियोलॉजिकल परीक्षा (संस्कृति) का बहुत महत्व है। इस प्रकार, एक विशेष प्रकार की एंटीबायोटिक चिकित्सा की अधिकतम प्रभावशीलता निर्धारित की जाती है।
विश्लेषण करते समय, यह याद रखना महत्वपूर्ण है कि कुछ सूक्ष्मजीव, जैसे न्यूमोकोकी, बहुत जल्दी मर जाते हैं क्योंकि उनमें आत्म-विनाश की प्रवृत्ति बढ़ जाती है। अत: फसलें कम समय में होनी चाहिए।

सांस्कृतिक (बैक्टीरियोलॉजिकल) अनुसंधान विधि तरीकों का एक समूह है जिसका उद्देश्य पोषक मीडिया पर खेती का उपयोग करके सूक्ष्मजीवों (बैक्टीरिया) की शुद्ध संस्कृतियों को अलग करना और पहचानना है।

शुद्ध संस्कृति एक ही प्रजाति के सूक्ष्मजीवों का संग्रह है। अक्सर, एक पृथक कॉलोनी (एकल माइक्रोबियल कोशिका की संतान) का चयन और खेती करके एक शुद्ध संस्कृति प्राप्त की जाती है।

विधि के चरण:

1. शोध हेतु सामग्री का संग्रह।

2. शुद्ध संस्कृति का पृथक्करण एवं उसकी पहचान।

3. निष्कर्ष.

अनुसंधान के लिए सामग्री का संग्रह.अध्ययन की गई सामग्री का प्रकार अध्ययन के उद्देश्य पर निर्भर करता है (निदान - रोगी से; महामारी विज्ञान विश्लेषण - बाहरी वातावरण, भोजन, रोगी और (या) बैक्टीरिया वाहक से)।

शुद्ध संस्कृति का अलगाव. 3 या 4 चरण शामिल हैं:

1. पृथक कालोनियों को प्राप्त करने के लिए एक ठोस पोषक माध्यम (अधिमानतः विभेदक निदान या चयनात्मक) के साथ एक डिश पर सामग्री का टीकाकरण (प्रारंभिक माइक्रोस्कोपी के बाद)। यह प्रायः यांत्रिक पृथक्करण द्वारा निर्मित होता है। कुछ मामलों में (उदाहरण के लिए, रक्त), सामग्री को पहले तरल संवर्धन माध्यम में डाला जाता है और फिर अगर माध्यम के साथ एक प्लेट में स्थानांतरित किया जाता है। कभी-कभी, बुवाई से पहले, सामग्री का चयनात्मक उपचार किया जाता है (पृथक सूक्ष्मजीवों के गुणों को ध्यान में रखते हुए; उदाहरण के लिए, प्रतिरोधी बैक्टीरिया को अलग करने के लिए एसिड या क्षार के साथ उपचार)। 18-24 घंटों के लिए 37 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर खेती करें। विभिन्न प्रकार के जीवाणुओं के लिए खेती का समय अलग-अलग हो सकता है।

2(3):ए) आगर प्लेट (सांस्कृतिक विशेषताओं) पर कॉलोनियों का अध्ययन, सबसे विशिष्ट लोगों का चयन; बी) इन कॉलोनियों से धुंधलापन (ग्राम या अन्य तरीकों) से स्मीयर तैयार करना; ए) अध्ययनित कॉलोनी के शेष भाग को एक संचय माध्यम पर स्क्रीनिंग करना और इसे इष्टतम तापमान पर थर्मोस्टेट में विकसित करना।

3(4). संचय माध्यम पर प्राप्त संस्कृति की शुद्धता का अध्ययन। इस के साथ

एक स्मीयर तैयार किया जाता है, दाग लगाया जाता है (आमतौर पर ग्राम दाग के साथ), और सूक्ष्मदर्शी रूप से जांच की जाती है

रूपात्मक और टिनक्टोरियल समरूपता (दृश्य के विभिन्न क्षेत्रों में)।

4(5). शुद्ध संस्कृति की पहचान.

निष्कर्ष।संदर्भ (प्रकार) उपभेदों के गुणों की तुलना में विशेषताओं के सेट के आधार पर, सामग्री से पृथक सूक्ष्मजीव के प्रकार का संकेत दिया जाता है।

विधि मूल्यांकन:

फायदे:अपेक्षाकृत उच्च संवेदनशीलता और सटीकता, परीक्षण सामग्री में रोगाणुओं की संख्या निर्धारित करने की क्षमता, साथ ही एंटीबायोटिक दवाओं के प्रति संवेदनशीलता; कमियां:सापेक्ष अवधि, विधि महंगी है।

21. एरोबेस और एनारोबेस के लिए पोषक तत्व मीडिया। पोषक तत्व मीडिया, वर्गीकरण के लिए आवश्यकताएँ।

आवश्यकताएं:

मीडिया को पोषक होना चाहिए

एक निश्चित पीएच होना चाहिए

आइसोटोनिक होना चाहिए, यानी वातावरण में आसमाटिक दबाव कोशिका के समान ही होना चाहिए।

नम होना चाहिए और बहुत अधिक पतला नहीं होना चाहिए

एक निश्चित रेडॉक्स क्षमता होनी चाहिए

निष्फल होना चाहिए

एकीकृत होना चाहिए, अर्थात इसमें व्यक्तिगत सामग्रियों की निरंतर मात्रा होती है।

पोषक तत्व मीडिया को विभाजित किया जा सकता है:

ए) मूल रूप से:

1) प्राकृतिक - प्राकृतिक खाद्य उत्पाद (मांस, दूध, आलू);

2) कृत्रिम - बढ़ते रोगाणुओं के लिए विशेष रूप से तैयार: - प्राकृतिक उत्पादों से मीडिया (मांस पानी, मांस-अर्क शोरबा (एमपीबी), मांस-अर्क अगर (एमपीए), - एक स्थिर संरचना नहीं; - सिंथेटिक पोषक तत्व मीडिया - सख्ती से समाधान आसुत जल में लवण, अमीनो एसिड, नाइट्रोजनस बेस, विटामिन की निर्धारित मात्रा - एक स्थिर संरचना होती है, जिसका उपयोग टीके, प्रतिरक्षा सीरम और एंटीबायोटिक्स प्राप्त करने के लिए बढ़ते सूक्ष्मजीवों और सेल संस्कृतियों के लिए किया जाता है;

बी) उद्देश्य से:

1) सामान्य प्रयोजन (एमपीबी, एमपीए) - अधिकांश रोगाणु उन पर विकसित होते हैं;

2) चयनात्मक - मिश्रण से एक प्रकार के सूक्ष्म जीव के विकास को चुनिंदा रूप से बढ़ावा देना (उदाहरण के लिए, स्टेफिलोकोसी के लिए जर्दी-नमक अगर);

3) विभेदक निदान - वे माध्यम की उपस्थिति से एक प्रकार के सूक्ष्म जीव को दूसरों से अलग करने की अनुमति देते हैं (उदाहरण के लिए, सूक्ष्मजीवों के आंतों के समूह के लिए एंडो, लेविन का वातावरण)।

इसके अलावा, पर निर्भर करता है उपयोग के उद्देश्यशुद्ध संस्कृतियों को अलग करने की योजना में, निम्नलिखित मीडिया को उद्देश्य से अलग किया जा सकता है:

1) संवर्धन - रोगज़नक़ के साथ आने वाले रोगाणुओं की वृद्धि को दबाना;

2) पृथक कालोनियाँ प्राप्त करना;

3) शुद्ध संस्कृति का संचय;

बी) संगति से:

1) तरल;

2) अर्ध-तरल (0.5-0.7% की सांद्रता पर अगर-अगर के साथ);

3) घना - 1% से ऊपर।

बैक्टीरियोलॉजिकल रिसर्च विधि (बीएलएमआई)- पोषक तत्व मीडिया पर खेती का उपयोग करके बैक्टीरिया की शुद्ध संस्कृतियों को अलग करने और सूक्ष्मजीवों की रूपात्मक, सांस्कृतिक, जैव रासायनिक, आनुवंशिक, सीरोलॉजिकल, जैविक, पर्यावरणीय विशेषताओं के अध्ययन के आधार पर प्रजातियों की पहचान करने पर आधारित एक विधि।

स्वास्थ्य मंत्रालय द्वारा अनुमोदित मानक निदान योजनाओं का उपयोग करके संक्रमण का जीवाणुविज्ञानी निदान किया जाता है।

शुद्ध संस्कृति -पोषक माध्यम पर उगाए गए एक प्रजाति के बैक्टीरिया, जिनके गुणों का अध्ययन किया जा रहा है।

छानना- एक प्रजाति के सूक्ष्मजीवों की एक पहचानी गई शुद्ध संस्कृति, एक विशिष्ट समय पर एक विशिष्ट स्रोत से अलग की गई। एक ही प्रजाति के उपभेद जैव रासायनिक, आनुवंशिक, सीरोलॉजिकल, जैविक और अन्य गुणों के साथ-साथ अलगाव के स्थान और समय में मामूली अंतर हो सकते हैं।

बीएलएमआई लक्ष्य:

1. एटियलॉजिकल निदान करना: सूक्ष्मजीवों की शुद्ध संस्कृति को अलग करना और उसकी पहचान करना।

2. अतिरिक्त गुणों का निर्धारण, उदाहरण के लिए, एंटीबायोटिक दवाओं और बैक्टीरियोफेज के प्रति सूक्ष्मजीव की संवेदनशीलता।

3. सूक्ष्मजीवों की संख्या का निर्धारण (यूपीएम के कारण होने वाले संक्रमण के निदान में महत्वपूर्ण)।

4. सूक्ष्मजीवों की टाइपिंग, यानी अध्ययन के आधार पर अंतरविशिष्ट अंतर का निर्धारण आनुवंशिकऔर महामारी विज्ञान(फागोवर्स और सेरोवर्स) मार्कर.इसका उपयोग महामारी विज्ञान के उद्देश्यों के लिए किया जाता है, क्योंकि यह विभिन्न अस्पतालों और भौगोलिक क्षेत्रों में विभिन्न रोगियों और विभिन्न पर्यावरणीय वस्तुओं से पृथक सूक्ष्मजीवों की समानता स्थापित करना संभव बनाता है।

बीएलएमआई में कई चरण शामिल हैं,एरोबेस, ऐच्छिक अवायवीय और बाध्य अवायवीय जीवों के लिए अलग-अलग।

I. एरोबेस और ऐच्छिक अवायवीय जीवों की शुद्ध संस्कृति को अलग करने में बीएलएमआई के चरण।

अवस्था।

A. सामग्री का संग्रहण, परिवहन, भंडारण, पूर्व-प्रसंस्करण।कभी-कभी, बुवाई से पहले, पृथक सूक्ष्मजीवों के गुणों को ध्यान में रखते हुए, सामग्री का चयनात्मक प्रसंस्करण किया जाता है। उदाहरण के लिए, एसिड-फास्ट माइकोबैक्टीरियम ट्यूबरकुलोसिस की उपस्थिति के लिए थूक या अन्य सामग्री की जांच करने से पहले, सामग्री को एसिड या क्षार के समाधान के साथ इलाज किया जाता है।

बी. संवर्धन माध्यम में बुआई(यदि आवश्यक हो)। यह तब किया जाता है जब परीक्षण सामग्री में कम संख्या में बैक्टीरिया होते हैं, उदाहरण के लिए, रक्त संस्कृति को अलग करते समय। ऐसा करने के लिए, बुखार के चरम पर बड़ी मात्रा में लिया गया रक्त (वयस्कों में 8-10 मिली, बच्चों में 4-5 मिली) 1:10 के अनुपात में माध्यम में डाला जाता है (जीवाणुनाशक रक्त के प्रभाव को दूर करने के लिए) कारक); फसल को 18-24 घंटों के लिए 37 0 C के तापमान पर ऊष्मायन किया जाता है।

बी. अध्ययनाधीन सामग्री की माइक्रोस्कोपी।जांच की जा रही सामग्री से एक स्मीयर तैयार किया जाता है, जिसे ग्राम या किसी अन्य विधि से रंगा जाता है और माइक्रोस्कोप के तहत जांच की जाती है। मौजूद माइक्रोफ्लोरा और उसकी मात्रा का आकलन किया जाता है। आगे के अध्ययन में प्रारंभिक स्मीयर में मौजूद सूक्ष्मजीवों को अलग करना चाहिए।

डी. पृथक कालोनियां प्राप्त करने के लिए पोषक माध्यम पर बुआई करें।पृथक कालोनियों को प्राप्त करने के लिए सामग्री को एक विभेदक निदान या चयनात्मक माध्यम के साथ एक डिश पर यांत्रिक पृथक्करण की विधि का उपयोग करके एक लूप या स्पैटुला के साथ टीका लगाया जाता है। बुआई के बाद, कप को उल्टा कर दिया जाता है (संघनन तरल की बूंदों के साथ कॉलोनियों को धब्बा से बचाने के लिए), लेबल किया जाता है और 18-24 घंटों के लिए 37 0 C के तापमान पर थर्मोस्टेट में रखा जाता है।

यह याद रखना चाहिए कि माइक्रोबियल संस्कृतियों की बुआई और पुनः बुआई करते समय, कार्यकर्ता का ध्यान पोषक मीडिया के संदूषण को रोकने और दूसरों के संक्रमण और स्वयं-संक्रमण को रोकने के लिए सड़न रोकनेवाला के नियमों का पालन करने पर दिया जाना चाहिए!

अवसरवादी सूक्ष्मजीवों के कारण होने वाले संक्रमण के मामले में, जहां रोग संबंधी सामग्री में मौजूद सूक्ष्मजीवों की संख्या महत्वपूर्ण होती है, सामग्री का मात्रात्मक बीजारोपण किया जाता है, जिसके लिए सामग्री के 100 गुना तनुकरण (आमतौर पर 3 तनुकरण) की एक श्रृंखला होती है। परीक्षण ट्यूबों में बाँझ आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान पहले तैयार किया जाता है। उसके बाद, प्रत्येक तनुकरण का 50 μl पेट्री डिश में पोषक माध्यम पर बोया जाता है।

अवस्था।

A. मीडिया पर कालोनियों की आकृतियों का अध्ययन, उनकी माइक्रोस्कोपी।वे बर्तनों को देखते हैं और इष्टतम पोषक माध्यम, विकास दर और सूक्ष्मजीवों के विकास पैटर्न पर ध्यान देते हैं। अध्ययन करना चुनें स्ट्रोक के किनारे स्थित अलग-अलग कॉलोनियां, केंद्र के करीब।यदि कई प्रकार की कॉलोनियाँ बढ़ती हैं, तो प्रत्येक की अलग से जाँच की जाती है। कालोनियों के संकेतों का मूल्यांकन किया जाता है (तालिका 7)। यदि आवश्यक हो, तो फसलों वाले व्यंजनों को एक आवर्धक कांच के माध्यम से या कम आवर्धन लेंस और एक संकीर्ण डायाफ्राम के साथ माइक्रोस्कोप का उपयोग करके देखा जाता है। कालोनियों के विभिन्न आकारिकी के टिंक्टोरियल गुणों का अध्ययन किया जाता है; इसके लिए, अध्ययन के तहत कॉलोनी का एक हिस्सा तैयार किया जाता है धब्बा,ग्राम या अन्य विधियों द्वारा सूक्ष्मदर्शी रूप से अभिरंजित किया गया और संस्कृति की आकृति विज्ञान और शुद्धता का निर्धारण किया गया। यदि आवश्यक हो, तो डालें कांच पर अनुमानित आरएपॉलीवलेंट सीरम के साथ.

B. शुद्ध संस्कृति का संचय।एक शुद्ध कल्चर को संचित करने के लिए, सभी मॉर्फोटाइप्स की अलग-अलग कॉलोनियों को तिरछे अगर या किसी अन्य पोषक माध्यम के साथ अलग-अलग ट्यूबों में डाला जाता है और +37 0 C पर थर्मोस्टेट में इनक्यूबेट किया जाता है (यह तापमान अधिकांश सूक्ष्मजीवों के लिए इष्टतम है, लेकिन यह भिन्न हो सकता है, क्योंकि उदाहरण, कैम्पिलोबैक्टीरियम एसपीपी।– +42 0 सी, कैंडिडा एसपीपी. और येर्सिनिया पेस्टिस– +25 0 सी).

क्लिग्लर माध्यम का उपयोग आमतौर पर एंटरोबैक्टीरिया के संचय माध्यम के रूप में किया जाता है।

क्लिग्लर के माध्यम की संरचना:एमपीए, 0.1% ग्लूकोज, 1% लैक्टोज, हाइड्रोजन सल्फाइड अभिकर्मक (फेरस सल्फेट + सोडियम थायोसल्फेट + सोडियम सल्फाइट), फिनोल लाल संकेतक। माध्यम का प्रारंभिक रंग लाल-लाल है, परीक्षण ट्यूबों में माध्यम "ढलानदार" है: इसमें एक स्तंभ (2/3) और एक तिरछी सतह (1/3) है।

क्लिग्लर के माध्यम में बुआई सतह पर रेखा बनाकर और एक स्तंभ में चुभाकर की जाती है।

अवस्था।

A. संचय माध्यम पर वृद्धि का लेखा-जोखा, संस्कृति की शुद्धता का आकलनएक ग्राम स्मीयर में। ध्यान दें विकास स्वरूपपृथक शुद्ध संस्कृति. दृष्टिगत रूप से शुद्ध संस्कृति की विशेषता एकसमान विकास है। पर सूक्ष्मदर्शी द्वारा परीक्षणइस तरह के कल्चर से तैयार किया गया एक दागदार स्मीयर दृश्य के विभिन्न क्षेत्रों में रूपात्मक और टिंक्टोरियल रूप से सजातीय कोशिकाओं को प्रकट करता है। हालाँकि, कुछ प्रकार के जीवाणुओं में निहित स्पष्ट फुफ्फुसावरण के मामले में, शुद्ध संस्कृति के स्मीयरों में एक साथ विभिन्न आकारिकी वाली कोशिकाएँ हो सकती हैं।

यदि क्लिगलर के संकेतक माध्यम का उपयोग संचय माध्यम के रूप में किया गया था, तो स्तंभ और तिरछे भाग में इसके रंग में परिवर्तन का आकलन किया जाता है, जिसका उपयोग जैव रासायनिक गुणों को निर्धारित करने के लिए किया जाता है: ग्लूकोज, लैक्टोज और हाइड्रोजन सल्फाइड उत्पादन का किण्वन। जब लैक्टोज विघटित होता है, तो माध्यम का तिरछा भाग पीला हो जाता है, और जब ग्लूकोज विघटित होता है, तो स्तंभ पीला हो जाता है। जब शर्करा के अपघटन के दौरान CO2 बनती है, तो गैस के बुलबुले या स्तंभ टूट जाते हैं। हाइड्रोजन सल्फाइड उत्पादन के मामले में, फेरस सल्फेट के फेरस सल्फाइड में रूपांतरण के कारण इंजेक्शन मार्ग पर कालापन देखा जाता है।

क्लिग्लर के माध्यम में रंग परिवर्तन की प्रकृति (चित्र 23) को सूक्ष्मजीवों द्वारा नाइट्रोजनयुक्त पदार्थों के टूटने की असमान तीव्रता और एरोबिक (एक तिरछी सतह पर) और एनारोबिक (एक स्तंभ में) स्थितियों में क्षारीय उत्पादों के गठन द्वारा समझाया गया है। .

एरोबिक स्थितियों के तहत, माध्यम के स्तंभ की तुलना में बेवल वाली सतह पर अधिक तीव्र क्षार गठन होता है। इसलिए, ग्लूकोज के अपघटन के दौरान, जो माध्यम में थोड़ी मात्रा में मौजूद होता है, बेवेल सतह पर बनने वाला एसिड जल्दी से बेअसर हो जाता है। वहीं, लैक्टोज के अपघटन के दौरान, जो माध्यम में उच्च सांद्रता में मौजूद होता है, क्षारीय उत्पाद एसिड को बेअसर करने में सक्षम नहीं होते हैं।

स्तंभ में अवायवीय स्थितियों के तहत, क्षारीय उत्पाद नगण्य मात्रा में बनते हैं, इसलिए यहां ग्लूकोज किण्वन का पता लगाया जाता है।

चावल। 23.क्लिग्लर सूचक माध्यम:

1 - प्रारंभिक,

2 - विकास के साथ ई कोलाई,

3- विकास के साथ एस. पैराटीफी बी,

4 - विकास के साथ एस. टाइफी

ई कोलाईगैस निर्माण के साथ ग्लूकोज और लैक्टोज को विघटित करें, हाइड्रोजन सल्फाइड का उत्पादन न करें। इनके कारण माध्यम में टूट-फूट के साथ स्तंभ और बेवल वाले हिस्से में पीलापन आ जाता है।

एस पैराटाइफीगैस निर्माण के साथ ग्लूकोज को विघटित करें, लैक्टोज नकारात्मक। वे टूटने के साथ स्तंभ के पीलेपन का कारण बनते हैं; बेवल वाला भाग रंग नहीं बदलता है और लाल रंग का बना रहता है। जिसमें एस. पैराटीफी बीहाइड्रोजन सल्फाइड का उत्पादन करें (इंजेक्शन बढ़ने पर एक काला रंग दिखाई देता है), एस. पैराटाइफी एहाइड्रोजन सल्फाइड का उत्पादन न करें।

एस. टाइफीगैस बनने के बिना ग्लूकोज को विघटित करते हैं, लैक्टोज नकारात्मक होते हैं, हाइड्रोजन सल्फाइड का उत्पादन करते हैं। वे स्तंभ को बिना टूटे पीले रंग में बदल देते हैं, बेवल वाला हिस्सा रंग नहीं बदलता है और लाल रंग का रहता है, और इंजेक्शन बढ़ने पर काला रंग दिखाई देता है।

शिगेला एसपीपी.ग्लूकोज पॉजिटिव, लैक्टोज-नेगेटिव, हाइड्रोजन सल्फाइड का उत्पादन नहीं करते हैं। वे स्तंभ को पीला कर देते हैं (सेरोवर के आधार पर, ब्रेक के साथ या बिना), बेवल वाला हिस्सा रंग नहीं बदलता है और लाल रंग का बना रहता है।

ख. शुद्ध संस्कृति की अंतिम पहचान(प्रजाति या प्रकार के स्तर पर पृथक सूक्ष्मजीवों की व्यवस्थित स्थिति का निर्धारण) और एंटीबायोटिक दवाओं के प्रति पृथक संस्कृति की संवेदनशीलता के स्पेक्ट्रम का निर्धारण करना।

शुद्ध संस्कृति की पहचान करने के लिए इस चरण में जैव रासायनिक, आनुवंशिक, सीरोलॉजिकल और जैविक विशेषताओं का अध्ययन किया जाता है (तालिका 8)।

नियमित प्रयोगशाला अभ्यास में, पहचान के दौरान सभी गुणों का अध्ययन करने की आवश्यकता नहीं होती है। पृथक सूक्ष्मजीवों की प्रजाति (संस्करण) निर्धारित करने के लिए पर्याप्त जानकारीपूर्ण, सुलभ, सरल परीक्षणों का उपयोग करें।

बैक्टीरियोलॉजिकल अनुसंधान एक अध्ययन है जिसे सूक्ष्मजीवविज्ञानी निदान करने के लिए उनके गुणों को अलग करने और उनका अध्ययन करने के लिए डिज़ाइन किया गया है।

परीक्षण सामग्री को सड़न रोकने वाली परिस्थितियों में बाँझ कंटेनरों में एकत्र किया जाना चाहिए और जितनी जल्दी हो सके प्रयोगशाला में पहुंचाया जाना चाहिए। यदि आवश्यक हो, तो नमूनों को प्रशीतित संग्रहित किया जाना चाहिए। नमूना लेने की तकनीक वस्तु, रोग की प्रकृति और सूक्ष्मजीव के गुणों पर निर्भर करती है। बैक्टीरियोलॉजिकल अनुसंधान के सामान्य तरीकों में से एक बैक्टीरियोस्कोपी है।

अपरिवर्तित बैक्टीरिया का अध्ययन करने के लिए, दो तरीकों का उपयोग किया जाता है: एक कुचली हुई बूंद (स्लाइड और कवर ग्लास के बीच) और। यह याद रखना चाहिए कि अपरिवर्तित बैक्टीरिया की तैयारी संक्रामक होती है।

निश्चित तैयारियों की बैक्टीरियोस्कोपी के लिए स्मीयरों का उपयोग किया जाता है। उन्हें तैयार करने के लिए, परीक्षण तरल की एक बूंद को कांच की स्लाइड की सतह पर वितरित किया जाता है और फिर सुखाया जाता है। दवा को ठीक करने का सबसे आम तरीका इसे गैस बर्नर की लौ से गुजारना है। कुछ मामलों में, फिक्सिंग यौगिकों का उपयोग किया जाता है। स्थिर तैयारी आमतौर पर दागदार होती है (सूक्ष्मजीवों का धुंधलापन देखें)। बैक्टीरियोलॉजिकल अनुसंधान के सबसे महत्वपूर्ण तत्वों में बैक्टीरियल लूप या पाश्चर पिपेट के साथ किए गए टीकाकरण और उपसंस्कृति शामिल हैं। लूप को एक लौ में एनीलिंग करके निष्फल किया जाता है, फिर इसे असंक्रमित अगर के एक क्षेत्र को छूकर या एक बाँझ तरल में धोकर ठंडा किया जाता है। पाश्चर पिपेट का उपयोग करते समय, चिमटी से टिप को तोड़ दें, पिपेट को बर्नर की लौ से कई बार गुजारें और इसे ठंडा होने दें। बुआई करते समय तरल और ठोस पोषक माध्यम का उपयोग किया जाता है। जब तिरछे अगर पर बोया जाता है, तो जीवाणु संस्कृति को अगर की सतह पर एक लूप के साथ रगड़ा जाता है। अगर या जिलेटिन कॉलम की मोटाई में बुआई करते समय, पोषक माध्यम को एक लूप या एक विशेष सुई के साथ ट्यूब के नीचे तक छेद दिया जाता है। तरल माध्यम में बुआई करते समय, यह सुनिश्चित करने के लिए सावधानी बरतनी चाहिए कि तरल बाहर न गिरे और नलियों और स्टॉपर्स के किनारों को गीला न कर दे। टीकाकरण और उपसंस्कृति गैस बर्नर की लौ के पास की जानी चाहिए, परीक्षण ट्यूब लंबे समय तक खुली नहीं रहनी चाहिए, संस्कृति के साथ लूप या पाश्चर पिपेट को कुछ भी नहीं छूना चाहिए; टेस्ट ट्यूब को बंद करने से पहले किनारों को जला देना चाहिए। टीकाकरण ट्यूबों को तुरंत लेबल किया जाना चाहिए।

बैक्टीरियोलॉजिकल अनुसंधान का सबसे महत्वपूर्ण चरण पहचान है - शुद्ध संस्कृति के रूप में प्राप्त बैक्टीरिया की प्रजाति या प्रकार का निर्धारण। बैक्टीरिया की पहचान करते समय उनके शारीरिक और जैव रासायनिक गुणों और विष निर्माण का अध्ययन किया जाता है। बैक्टीरिया (प्रतिक्रियाओं) की पहचान के लिए सीरोलॉजिकल तरीकों का व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है। कई मामलों में, सूक्ष्मजीवों की पहचान के लिए एक जैविक विधि प्रभावी होती है, जो अध्ययन की जा रही सामग्री या परिणामी जीवाणु संस्कृति के साथ प्रयोगशाला जानवरों को संक्रमित करने और जानवरों में विशिष्ट रोग संबंधी परिवर्तनों की पहचान करने पर आधारित होती है।

शुद्ध संस्कृतियों को अलग करने के लिए यांत्रिक और जैविक तरीकों का उपयोग किया जाता है। यांत्रिक विधि का एक उदाहरण: परीक्षण सामग्री की एक बूंद को घने पोषक माध्यम की सतह पर एक ही बाँझ स्पैटुला या जीवाणु लूप के साथ क्रमिक रूप से पहले, दूसरे और तीसरे में डाला जाता है। एक शुद्ध संस्कृति का अलगाव विकसित व्यक्तिगत कॉलोनियों से किया जाता है और इसमें ताजा पोषक माध्यम पर उनकी जांच और स्क्रीनिंग शामिल होती है। शुद्ध संस्कृतियों को अलग करने की जैविक विधियाँ पृथक सूक्ष्म जीव की एक या दूसरी संपत्ति को ध्यान में रखने पर आधारित होती हैं, जो इसे अध्ययन के तहत सामग्री में पाए जाने वाले अन्य रोगाणुओं से अलग करती है।

जैविक विधि इस प्रकार के पोषक मीडिया का उपयोग करती है जिसमें ऐसी स्थितियाँ बनाई जाती हैं जो एक निश्चित प्रकार के सूक्ष्म जीव के विकास के लिए अनुकूल होती हैं। जैविक तरीकों में प्रयोगशाला जानवरों का संक्रमण भी शामिल है जो बैक्टीरिया की पृथक प्रजातियों के प्रति संवेदनशील होते हैं।

बैक्टीरियोलॉजिकल अनुसंधान किसी रोगी, वाहक या पर्यावरणीय वस्तुओं पर रोगजनक सूक्ष्मजीवों की पहचान करने के तरीकों का एक सेट है। एक निश्चित वातावरण (वस्तु) के माइक्रोबियल परिदृश्य का अध्ययन करने के लिए, बाहरी पर्यावरण के प्रदूषण की डिग्री को चिह्नित करने वाले अवसरवादी और सैनिटरी-संकेतक रोगाणुओं का पता लगाने के लिए बैक्टीरियोलॉजिकल अध्ययनों का भी उपयोग किया जाता है। जीवाणुविज्ञानी अनुसंधान का उपयोग निदान, संक्रामक रोगों की रोकथाम, मानव पर्यावरण की स्वच्छता और स्वच्छ विशेषताओं के लिए, वैज्ञानिक अनुसंधान के लिए किया जा सकता है।

बैक्टीरियोलॉजिकल अनुसंधान की सामग्री और विधि विश्लेषण के उद्देश्य, पर्यावरणीय स्थितियों, रोगजनन और रोग के पाठ्यक्रम पर निर्भर करती है। यदि बैक्टेरिमिया मौजूद है, तो रक्त संस्कृति का उपयोग करके सूक्ष्म जीव का पता लगाया जाता है। स्पष्ट स्थानीय घावों के मामलों में, प्रभावित अंग (डिप्थीरिया, पेचिश, गोनोरिया, आदि) के स्राव या स्राव में रोगज़नक़ की तलाश की जानी चाहिए। अंत में, एक जटिल पाठ्यक्रम वाले रोगों में, जब (उदाहरण के लिए, टाइफाइड बुखार में) बैक्टीरिया को छोटी आंतों के घावों से बदल दिया जाता है, तो प्रत्येक चरण में एक उपयुक्त शोध पद्धति का उपयोग किया जाता है: रोग के पहले सप्ताह के दौरान, रक्त संस्कृतियां किया जाता है, दूसरे में सबसे विश्वसनीय सीरोलॉजिकल परीक्षण, तीसरे सप्ताह से शुरू होकर, स्टूल कल्चर द्वारा एक सकारात्मक परिणाम प्राप्त होता है; बाद की विधि का उपयोग स्वस्थ्य लोगों के बीच बैक्टीरिया वाहकों का पता लगाने और उनकी निगरानी के लिए नियंत्रण अध्ययन के रूप में भी किया जाता है।

इनमें से कोई भी कार्य सूक्ष्मजीवों के अलगाव और निर्धारण के लिए डिज़ाइन की गई विधियों का उपयोग करके किया जाता है। सूक्ष्म जीव की विशेषताओं के आधार पर, विधियों के पूरे सेट या उसके भागों का उपयोग किया जाता है।

बैक्टीरियोस्कोपी सबसे सुलभ तकनीक है, जो सामग्री की सूक्ष्म जांच पर आधारित है। ताजा तैयारियों की माइक्रोस्कोपिंग करते समय, आप कुछ सूक्ष्म रासायनिक प्रतिक्रियाओं (उदाहरण के लिए, लुगोल के समाधान के साथ आयोडोफिलिक बैक्टीरिया को धुंधला करना) या बैक्टीरिया के विभिन्न संरचनात्मक भागों के चयनात्मक धुंधलापन का उपयोग कर सकते हैं।

रंगीन तैयारी में बैक्टीरिया को अधिक स्पष्ट रूप से पहचाना जा सकता है। परीक्षण की जाने वाली सामग्री को कांच की स्लाइड पर एक पतली और यथासंभव समान परत में लगाया जाता है। तैयारी को हवा में सूखने दें और आम तौर पर स्वीकृत तरीकों में से किसी एक का उपयोग करके इसे ठीक करें, लेकिन अधिकतर आग लगाकर, यानी, जल्दी से तैयारी को बर्नर लौ पर दो या तीन बार पास करें ताकि ग्लास गर्म हो, लेकिन गर्म नहीं। निर्धारण के बाद ठंडा की गई तैयारी को एक साधारण या विभेदक दाग से दाग दिया जाता है (सूक्ष्मजीवों का धुंधलापन देखें)। प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी के लिए, देशी और सूखी दोनों तैयारियों का उपयोग किया जाता है। इस मामले में, कुछ रंगों से उपचार करने से सूक्ष्मजीवी शरीर या संपूर्ण सूक्ष्म जीव की संरचनाएं पराबैंगनी या छोटी नीली किरणों में चमकने लगती हैं। एक अन्य संशोधन में, रोगाणुओं का उपचार फ्लोरोसेंट (रंग) युक्त विशिष्ट सीरम से किया जाता है। सीरम से मेल खाते बैक्टीरिया चमक उठेंगे क्योंकि लेबल वाला सीरम उन पर जमा हो जाएगा। हेटरोलॉगस बैक्टीरिया चमक नहीं पाएंगे।

बैक्टीरियोस्कोपी विधि का व्यापक रूप से कुछ संक्रामक रोगों (गोनोरिया, तपेदिक, आवर्तक बुखार) के बैक्टीरियोलॉजिकल निदान के लिए उपयोग किया जाता है, साथ ही किसी अंग (टॉन्सिल, योनि), उत्पाद या अन्य वस्तु के माइक्रोफ्लोरा के पूरे परिसर का अध्ययन करने के लिए भी किया जाता है।

बुआई विधि, यानी, वांछित सूक्ष्मजीव की शुद्ध संस्कृति को अलग करना, बैक्टीरियोस्कोपी की तुलना में बैक्टीरियोलॉजिकल निदान की अधिक सटीक और विश्वसनीय विधि है। ताजा सामग्री को पेट्री डिश में डाले गए घने पोषक माध्यम की सतह पर फैलाया जाता है। प्राथमिक बीजारोपण किसी दिए गए सूक्ष्म जीव के लिए अनुकूल सामान्य मीडिया, विभेदक या चयनात्मक मीडिया पर किया जाता है। पोषक तत्व माध्यम की पसंद (देखें), साथ ही बुवाई के लिए ताजा सामग्री के पूर्व-उपचार की विधि, विदेशी माइक्रोफ्लोरा के साथ इसके संदूषण की डिग्री पर निर्भर करती है। 24-48 घंटों में. किसी दिए गए सूक्ष्म जीव के लिए इष्टतम तापमान पर थर्मोस्टेट में रखे जाने पर, कपों की जांच की जाती है और संदिग्ध कॉलोनियों को मीडिया पर उपसंस्कृत किया जाता है जो इस रोगज़नक़ के प्रसार को बढ़ावा देते हैं। इस प्रकार, सजातीय जीवाणुओं का एक कल्चर प्राप्त होता है, जिसकी पहचान की जानी चाहिए।

एक सूक्ष्म जीव की पहचान एक रंगीन तैयारी में उसकी आकृति विज्ञान का अध्ययन करने और एक कुचली हुई बूंद (देखें) में रोगाणुओं के आकार और उनकी गतिशीलता का निर्धारण करने से शुरू होती है। अगला कदम प्रत्येक प्रकार के लिए विशिष्ट संयोजनों में कार्बोहाइड्रेट, अमीनो एसिड और यूरिया को तोड़ने के लिए बैक्टीरिया की एंजाइमेटिक क्षमता का अध्ययन करना है। बैक्टीरिया में, शर्करा और प्रोटीयोलाइटिक एंजाइमों का सबसे अधिक अध्ययन किया जाता है।

एक सूक्ष्म जीव की पहचान को प्रत्येक जीनस और सूक्ष्मजीवों के प्रकार की विशेषता वाले अन्य गुणों के अध्ययन द्वारा पूरक किया जाना चाहिए। इन गुणों में विभिन्न जानवरों की लाल रक्त कोशिकाओं को चुनिंदा रूप से घोलने की क्षमता (हेमोलिसिस), रक्त प्लाज्मा का थक्का बनाना (प्लाज्मा जमावट), फाइब्रिन के थक्के को घोलना (फाइब्रिनोलिसिस) आदि शामिल हैं। बैक्टीरिया की इन सभी विशेषताओं का उपयोग उनके निर्धारण में विभेदक विशेषताओं के रूप में किया जा सकता है। .

कुछ माइक्रोबियल प्रजातियों, मुख्य रूप से रोगजनक कोलीफॉर्म बैक्टीरिया की निश्चित पहचान में सीरोलॉजिकल पहचान शामिल है (माइक्रोबियल पहचान देखें)। आमतौर पर, इस उद्देश्य के लिए, एक एग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया की जाती है, यानी, एक ही नाम के प्रतिरक्षा सीरम के प्रभाव में बैक्टीरिया की भीड़ का पता लगाया जाता है। किसी विशेष प्रजाति के विरुद्ध सीरम में रोगाणुओं का एकत्रीकरण उस प्रजाति की सदस्यता का संकेत देता है। आमतौर पर, एग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया लगभग कांच पर और अंतिम निर्धारण के लिए सीरम तनुकरण के साथ टेस्ट ट्यूब में की जाती है।

वर्णित तरीके से कई रोगाणुओं की पूरी तरह से पहचान नहीं की जा सकती है। फिर पहचान को प्रयोगशाला जानवरों के संक्रमण द्वारा पूरक किया जाना चाहिए, क्योंकि कुछ जीवाणुओं में रोगजनकता या विषाक्तता की विशेषता होती है, जो जानवरों के संक्रमित होने पर प्रकट होती है। कुछ मामलों में, जानवरों का संक्रमण रोगजनक रोगाणुओं के संचय के लिए एक विधि के रूप में भी कार्य करता है।

किसी संस्कृति की आकृति विज्ञान, जैव रासायनिक, सीरोलॉजिकल और, जहां आवश्यक हो, जैविक गुणों के अध्ययन के दौरान एकत्र की गई सभी विशेषताओं की तुलना ही पहचान के लिए आधार प्रदान कर सकती है। यदि पृथक सूक्ष्म जीव विशिष्ट है तो सकारात्मक परीक्षण परिणाम का उत्तर कठिन नहीं है। इस मामले में, जीनस, प्रजाति और, यदि निर्धारित हो, तो जीवाणु का प्रकार इंगित करें। जब एक सूक्ष्म जीव को अलग किया जाता है जो किसी विशिष्ट विशेषता से कुछ गुणों में विचलन करता है, तो विचलन विशेषता को इंगित करते हुए एक उत्तर दिया जाता है। इस मामले में, यदि बीमारी का कोर्स या सामग्री एकत्र करने की स्थितियाँ इसकी अनुमति देती हैं तो अध्ययन को दोहराना उपयोगी होता है। अन्य, अधिक जटिल तरीकों का उपयोग करके अतिरिक्त अध्ययन के लिए असामान्य रोगाणुओं की संस्कृति का विषय बनाना भी उपयोगी है।

बैक्टीरियोलॉजिकल अध्ययन के नकारात्मक परिणाम सापेक्ष महत्व के होते हैं और केवल यह दर्शाते हैं कि सामग्री के परीक्षण किए गए हिस्से में आवश्यक रोगाणु नहीं थे या गैर-व्यवहार्य थे। हालाँकि, वे दूसरे हिस्से में मौजूद हो सकते हैं। इस कारण से, उदाहरण के लिए, बेसिली कैरिज (टाइफाइड बुखार, पेचिश, डिप्थीरिया) की जांच करते समय, बार-बार अध्ययन की आवश्यकता होती है।

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बैक्टीरियोलॉजिकल विधि का उपयोग रोगी से प्राप्त सामग्री से शुद्ध संस्कृति में रोगज़नक़ को अलग करना और गुणों के एक सेट के अध्ययन के आधार पर इसकी पहचान करना संभव बनाता है। अधिकांश बैक्टीरिया विभिन्न कृत्रिम पोषक मीडिया (क्लैमाइडिया और रिकेट्सिया को छोड़कर) पर खेती करने में सक्षम हैं, इसलिए कई संक्रामक रोगों के निदान में बैक्टीरियोलॉजिकल विधि महत्वपूर्ण है।

यदि सकारात्मक परिणाम प्राप्त होता है, तो बैक्टीरियोलॉजिकल विधि रोगाणुरोधी दवाओं के प्रति पृथक रोगज़नक़ की संवेदनशीलता निर्धारित करने की अनुमति देती है। हालाँकि, इस अध्ययन की प्रभावशीलता कई मापदंडों पर निर्भर करती है, विशेष रूप से सामग्री एकत्र करने की शर्तेंऔर उसे परिवहनप्रयोगशाला के लिए.

को बुनियादी आवश्यकताएंबैक्टीरियोलॉजिकल अनुसंधान के लिए सामग्री के चयन और परिवहन की आवश्यकताओं में शामिल हैं:

• एटियोट्रोपिक उपचार शुरू होने से पहले सामग्री लेना;
• सामग्री एकत्र करते समय बाँझ शर्तों का अनुपालन;
• सामग्री संग्रह की तकनीकी शुद्धता;
• पर्याप्त मात्रा में सामग्री;
• सामग्री के भंडारण और परिवहन के लिए तापमान की स्थिति सुनिश्चित करना;
• सामग्री एकत्र करने और ठोस पोषक माध्यम पर बुआई के बीच समय अंतराल को कम करना।

प्रयोगशाला में सामग्री का परिवहन यथाशीघ्र किया जाना चाहिए, लेकिन इसके संग्रह के बाद 1-2 घंटे से अधिक नहीं। सामग्री के नमूनों को एक निश्चित तापमान पर रखा जाना चाहिए; विशेष रूप से, आम तौर पर बाँझ सामग्री (रक्त, मस्तिष्कमेरु द्रव) को 37 डिग्री सेल्सियस पर संग्रहीत और प्रयोगशाला में पहुंचाया जाता है। गैर-बाँझ सामग्री (मूत्र, श्वसन स्राव, आदि) को कमरे के तापमान पर 1-2 घंटे से अधिक या 4 डिग्री सेल्सियस (घरेलू रेफ्रिजरेटर की स्थिति) पर एक दिन से अधिक नहीं रखा जाता है। यदि विनियमित समय सीमा के भीतर नमूनों को प्रयोगशाला में पहुंचाना असंभव है, तो संरक्षण स्थितियों के तहत रोगजनकों की व्यवहार्यता को संरक्षित करने के लिए डिज़ाइन किए गए परिवहन मीडिया का उपयोग करने की सिफारिश की जाती है।

अनुसंधान के लिए रक्तबुखार की शुरुआत में, बढ़ते शरीर के तापमान की अवधि के दौरान रोगी से लिया जाना चाहिए। 4-6 घंटे के अंतराल पर लिए गए 3-4 रक्त नमूनों की जांच करने की सिफारिश की जाती है, जो "लापता" क्षणिक बैक्टीरिया के जोखिम को कम करने और पृथक अवसरवादी माइक्रोफ्लोरा की एटियलॉजिकल भूमिका की पुष्टि करने की क्षमता बढ़ाने के दृष्टिकोण से उचित है। रक्त से, यदि यह माइक्रोफ़्लोरा कई शिरापरक नमूनों में पाया जाता है। रक्त। एक वयस्क के लिए 10 मिलीलीटर और बच्चों के लिए 5 मिलीलीटर की मात्रा में रक्त का नमूना 1:10 के अनुपात में एरोबिक और एनारोबिक सूक्ष्मजीवों के लिए एक माध्यम के साथ कम से कम दो बोतलों में डाला जाता है। धमनी रक्त का एक एकल अध्ययन उचित है।

लेना मस्तिष्कमेरु द्रव(सीएसएफ) काठ का पंचर के दौरान डॉक्टर द्वारा सूखी बाँझ ट्यूब में 1-2 मिलीलीटर की मात्रा में उत्पादित किया जाता है। सैंपल को तुरंत प्रयोगशाला में पहुंचाया जाता है, जहां उसकी जांच भी तुरंत शुरू हो जाती है। यदि यह संभव नहीं है, तो सामग्री को कई घंटों तक 37 डिग्री सेल्सियस पर संग्रहीत किया जाता है। सीएसएफ की 1-2 बूंदों को ग्लूकोज के साथ अर्ध-तरल माध्यम वाली टेस्ट ट्यूब में और "रक्त" अगर के साथ पेट्री डिश में डालने से बैक्टीरियोलॉजिकल परीक्षा के सकारात्मक परिणामों की संख्या में काफी वृद्धि होती है। सामग्री भेजने के लिए, इज़ोटेर्मल बक्से, हीटिंग पैड, थर्मोज़ या किसी अन्य पैकेजिंग का उपयोग करें जहां तापमान लगभग 37 डिग्री सेल्सियस पर बनाए रखा जाता है।

मलमूत्रबैक्टीरियोलॉजिकल अनुसंधान के लिए, 3-5 ग्राम को एक टाइट-फिटिंग ढक्कन वाले बाँझ बर्तन में बाँझ लकड़ी के स्पैटुला का उपयोग करके लिया जाता है। एकत्रित सामग्री की जांच 2 घंटे के बाद शुरू होनी चाहिए। यदि इस समय के भीतर परीक्षा शुरू करना संभव नहीं है, तो थोड़ी मात्रा में सामग्री एकत्र की जानी चाहिए और उचित परिवहन माध्यम में रखा जाना चाहिए। मल एकत्र करते समय, व्यक्ति को पैथोलॉजिकल अशुद्धियों (बलगम, मवाद, उपकला कण, आदि) को जांच के लिए भेजने का प्रयास करना चाहिए, यदि कोई हो, तो रक्त की अशुद्धियों, जिनमें जीवाणुनाशक गुण होते हैं, को सामग्री में शामिल करने से बचना चाहिए।

सामग्री एकत्र करने के लिए रेक्टल स्वैब (कपास की नोक के साथ) का उपयोग किया जा सकता है। स्वाब को बाँझ आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान या परिवहन माध्यम (लेकिन तेल जेल नहीं) से गीला किया जाना चाहिए। इसे प्रति मलाशय में 5-6 सेमी की गहराई तक डाला जाता है और, टैम्पोन को घुमाकर, टैम्पोन पर मल के रंग की उपस्थिति की निगरानी करते हुए, इसे सावधानीपूर्वक हटा दें। यदि सामग्री का अध्ययन 2 घंटे के भीतर शुरू हो जाता है, तो स्वाब को सूखी टेस्ट ट्यूब में रखा जाता है, अन्यथा - परिवहन माध्यम में।

मुझे पेशाब आ रही है(स्वतंत्र रूप से जारी मूत्र का औसत भाग) 3-5 मिलीलीटर की मात्रा में बाहरी जननांग के गहन शौचालय के बाद एक बाँझ कंटेनर में एकत्र किया जाता है। सुबह के समय मूत्र एकत्र करना बेहतर होता है।

पित्तअपूतिता के नियमों का पालन करते हुए उपचार कक्ष में ग्रहणी इंटुबैषेण के दौरान ए, बी और सी भागों में अलग-अलग तीन बाँझ ट्यूबों में एकत्र किया गया।

गैस्ट्रिक पानी से धोना 20-50 मिलीलीटर की मात्रा में बाँझ जार में एकत्र किया गया। यह ध्यान में रखा जाना चाहिए कि इन मामलों में, गैस्ट्रिक पानी से धोना केवल उदासीन (सूक्ष्मजीवों पर बैक्टीरियोस्टेटिक या जीवाणुनाशक प्रभाव नहीं) समाधानों के साथ किया जाता है - अधिमानतः उबला हुआ पानी (सोडा, पोटेशियम परमैंगनेट, आदि को जोड़ने के बिना)।

थूक. खांसी के दौरे के दौरान निकलने वाले सुबह के थूक को एक रोगाणुहीन जार में एकत्र किया जाता है। खांसने से पहले, रोगी अपने दांतों को ब्रश करता है और भोजन के मलबे, विलुप्त उपकला और मौखिक माइक्रोफ्लोरा को यांत्रिक रूप से हटाने के लिए उबले हुए पानी से अपना मुंह धोता है।

ब्रोन्कियल पानी से धोना. ब्रोंकोस्कोपी के दौरान, 5 मिलीलीटर से अधिक आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान इंजेक्ट नहीं किया जाता है, इसके बाद एक बाँझ ट्यूब में सक्शन किया जाता है।

ग्रसनी, मुँह और नाक से स्राव. मौखिक गुहा से सामग्री खाली पेट या भोजन के 2 घंटे बाद एक बाँझ कपास झाड़ू या चम्मच के साथ श्लेष्म झिल्ली और उसके प्रभावित क्षेत्रों से लार ग्रंथियों के नलिकाओं के प्रवेश द्वार, जीभ की सतह और से ली जाती है। अल्सर से. यदि कोई फिल्म है, तो उसे रोगाणुहीन चिमटी से हटा दें। नाक गुहा से सामग्री को सूखे बाँझ कपास झाड़ू के साथ लिया जाता है, जिसे नाक गुहा में गहराई से डाला जाता है। नासोफरीनक्स से सामग्री एक बाँझ पश्च ग्रसनी कपास झाड़ू के साथ ली जाती है, जिसे सावधानीपूर्वक नाक के उद्घाटन के माध्यम से नासोफरीनक्स में डाला जाता है। यदि खांसी शुरू हो जाती है, तो खांसी खत्म होने तक टैम्पोन को नहीं हटाया जाता है। डिप्थीरिया का परीक्षण करने के लिए, नाक और गले से फिल्म और बलगम की एक साथ जांच की जाती है, सामग्री को अलग-अलग स्वाब के साथ लिया जाता है।

परीक्षण सामग्री को सूक्ष्मजीवों की व्यक्तिगत कॉलोनियों के विकास को प्राप्त करने के लिए विशेष तकनीकों का उपयोग करके ठोस पोषक तत्व मीडिया पर टीका लगाया जाता है, जिन्हें फिर रोगज़नक़ की शुद्ध संस्कृति को अलग करने के लिए जांचा जाता है।

कुछ प्रकार के जीवाणुओं को चयनात्मक मीडिया का उपयोग करके अलग किया जाता है जो विदेशी सूक्ष्मजीवों के विकास को रोकते हैं या ऐसे पदार्थ होते हैं जो कुछ रोगजनक रोगाणुओं के विकास को उत्तेजित करते हैं।

पोषक तत्व मीडिया पर पृथक सूक्ष्मजीव पहचान करना, अर्थात। उनकी प्रजाति या प्रकार का निर्धारण करें। हाल ही में, स्वास्थ्य देखभाल अभ्यास में पहचान के लिए, माइक्रोटेस्ट सिस्टम का उपयोग किया गया है, जो विभेदक निदान वातावरण के एक सेट के साथ पैनल हैं, जो अनुसंधान को गति देते हैं। तरल पोषक माध्यम में एंटीबायोटिक को पतला करके रोगाणुरोधी दवाओं के प्रति सूक्ष्मजीवों की संवेदनशीलता निर्धारित करने के लिए माइक्रोटेस्ट सिस्टम का भी उपयोग किया जाता है।

बैक्टीरियोलॉजिकल अध्ययन के परिणामों का आकलन करते समय, डॉक्टर को यह ध्यान रखना चाहिए कि नकारात्मक परिणाम का मतलब हमेशा रोगज़नक़ की अनुपस्थिति नहीं होता है और यह रोगाणुरोधी दवाओं के उपयोग, रक्त की उच्च माइक्रोसाइडल गतिविधि और तकनीकी त्रुटियों से जुड़ा हो सकता है। रोगी की सामग्री में एक रोगजनक सूक्ष्म जीव का पता लगाना, नैदानिक ​​​​तस्वीर की परवाह किए बिना, स्वस्थ, स्वस्थ या क्षणिक जीवाणु संचरण के मामले में संभव है।

सभी सड़न रोकनेवाला नियमों के अधीन, अवसरवादी सूक्ष्मजीवों (स्टैफिलोकोकस एपिडर्मिडिस, एस्चेरिचिया कोली) और यहां तक ​​कि सैप्रोफाइट्स के रक्त से अलगाव को बैक्टेरिमिया की अभिव्यक्ति माना जाना चाहिए, खासकर यदि ये रोगाणु सामग्री के एक से अधिक नमूनों या विभिन्न सब्सट्रेट्स में पाए जाते हैं ( रक्त, मूत्र), क्योंकि शरीर की प्रतिरक्षा सक्रियता को कम करके, ये और अन्य "गैर-रोगजनक" सूक्ष्मजीव सेप्सिस सहित संक्रामक प्रक्रियाओं के प्रेरक एजेंट हो सकते हैं।

एक निश्चित कठिनाई है गैर-बाँझ मीडिया की बैक्टीरियोलॉजिकल परीक्षा के परिणामों की व्याख्या, अर्थात्, अवसरवादी सूक्ष्मजीवों की एटियोलॉजिकल भूमिका का प्रमाण। इस मामले में, पृथक संस्कृतियों के प्रकार, सामग्री में किसी दिए गए प्रकार की माइक्रोबियल कोशिकाओं की संख्या, बीमारी के दौरान उनका बार-बार अलगाव, एक मोनोकल्चर की उपस्थिति या एक सूक्ष्मजीव के जुड़ाव जैसे संकेतकों को ध्यान में रखा जाता है।

युशचुक एन.डी., वेंगेरोव यू.वाई.ए.