ในปฏิกิริยานี้ขึ้นอยู่กับปรากฏการณ์สองประการ - การสลายตัวของแบคทีเรียและภาวะเม็ดเลือดแดงแตก ส่วนเสริมมีส่วนร่วมในการสำแดงของพวกเขา ดังนั้นจึงมีการใช้ส่วนประกอบสองระบบใน RSC: 1) ให้ปรากฏการณ์ของการสลายแบคทีเรียและใช้เพื่อวัตถุประสงค์ในการวินิจฉัย; 2) hemolytic, ตัวบ่งชี้, เสริม; ช่วยให้คุณสามารถกำหนดได้ว่าส่วนเติมเต็มถูกผูกไว้หรือไม่ผูกมัดในระบบแรก (ดูโทนสี รูปที่ I) ก่อนหน้านี้มีการใช้สารแขวนลอยของแบคทีเรียเป็นแอนติเจน ดังนั้นระบบแรกจึงเรียกว่า bacteriolytic (ในกรณีที่เป็นบวก จะเกิดการสลายของแบคทีเรีย)

การจัดตั้ง RSC ดำเนินการในสองขั้นตอน ในระยะแรกจะมีการเตรียมระบบสลายแบคทีเรีย: เซรั่มทดสอบ 0.5 มล. พร้อมแอนติเจนผสมในหลอดทดลองเติมส่วนประกอบเสริมในปริมาณที่กำหนดอย่างเคร่งครัด (ไทเทอร์) ส่วนผสมเสริมแอนติเจน-ซีรั่ม (ระบบสลายแบคทีเรีย) จะถูกเก็บไว้ในอ่างน้ำ (หรือเทอร์โมสตัท) เป็นเวลา 20...40 นาที ที่อุณหภูมิ 37...38 "C ผลลัพธ์ของอันตรกิริยาของส่วนประกอบในหลอดทดลองคือ มองไม่เห็นของเหลวยังคงโปร่งใสและไม่มีสี ในการตรวจสอบ ติดต่อ หากมีส่วนประกอบในระบบ bacteriolytic ขั้นตอนที่สองของปฏิกิริยาจะดำเนินการ: ส่วนประกอบของระบบ hemolytic จะถูกเพิ่มลงในหลอดทดลอง - เม็ดเลือดแดงแกะที่ถูกล้างและเม็ดเลือดแดงที่ไม่ทำงาน เซรั่มดังแสดงในแผนภาพส่วนประกอบทั้งหมดของระบบสลายแบคทีเรียเขย่าให้เข้ากันในหลอดทดลองวางใน อ่างอาบน้ำที่อุณหภูมิ 37...38"C เป็นเวลา 20...40 นาที จากนั้นจึงเติมส่วนประกอบของระบบโลหิตวิทยา เขย่าทุกอย่างอีกครั้ง แล้วนำไปแช่ในอ่างน้ำอีกครั้ง เป็นเวลา 10...15 นาที

การบัญชีเบื้องต้นของผลลัพธ์ หากได้รับซีรั่มจากสัตว์ที่ป่วยก็จะมีแอนติบอดีที่รวมกับแอนติเจนจำเพาะ ส่วนประกอบเชื่อมโยงกับสารเชิงซ้อนนี้ (แอนติเจน - แอนติบอดี) - ภาวะเม็ดเลือดแดงแตกไม่เกิดขึ้นผลลัพธ์ที่ได้คือค่าบวก

ไม่มีแอนติบอดีในซีรั่มจากสัตว์ที่มีสุขภาพดี: ไม่มีการสร้างแอนติเจนและแอนติบอดีที่ซับซ้อน ส่วนเสริมจะไม่ถูกผูกมัดในระบบแบคทีเรีย เมื่อเพิ่มเม็ดเลือดแดงและฮีโมไลซิน (นี่คือระหว่างแอนติเจนและแอนติบอดี) ส่วนเสริมจะทำปฏิกิริยากับคอมเพล็กซ์นี้ - ภาวะเม็ดเลือดแดงแตกเกิดขึ้นผลลัพธ์จะเป็นลบ (ดูรูปสี II)

การบัญชีขั้นสุดท้ายของผลลัพธ์ หลอดทดลองจะถูกทิ้งไว้ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 15...20 ชั่วโมง หากซีรั่มในระบบสลายแบคทีเรียมาจากสัตว์ป่วยจะเกิดสารเชิงซ้อนแอนติเจนและแอนติบอดีจำเพาะในหลอดทดลองซึ่งจะดูดซับ (จับ) สารที่เพิ่มเข้าไปทั้งหมด เสริม ดังนั้นในวินาทีที่เม็ดเลือดแดงแตก ระบบจะไม่เกิดภาวะเม็ดเลือดแดงแตก เซลล์เม็ดเลือดแดงจะตกลงไปที่ด้านล่างของหลอดทดลอง และของเหลวเหนือตะกอนจะใส ผลลัพธ์ RSC เป็นบวก

หากซีรั่มทดสอบไม่มีแอนติบอดีจำเพาะต่อแอนติเจนที่ใช้ (ในกรณีที่ซีรั่มมาจากสัตว์ที่มีสุขภาพดี) สารเชิงซ้อนของแอนติเจน-แอนติบอดีจะไม่เกิดขึ้นในระบบสลายแบคทีเรีย ดังนั้นส่วนเสริมจึงไม่ถูกดูดซับในระบบนี้ แต่ยังคงเป็นอิสระ เมื่อเพิ่มส่วนประกอบของระบบเม็ดเลือดแดง (ในระยะที่สองของปฏิกิริยา) ส่วนประกอบเสริมจะมีปฏิกิริยากับคอมเพล็กซ์ที่สอง (ฮีโมลิซิน - เซลล์เม็ดเลือดแดง) ภาวะเม็ดเลือดแดงแตกเกิดขึ้นของเซลล์เม็ดเลือดแดง - ไม่มีการตกตะกอนของเหลวในหลอดทดลองคือ วานิชสีแดง ผลลัพธ์ RSC เป็นลบ

อาร์เอสเค. ใช้แล้ว: 1) เพื่อตรวจหาแอนติบอดีจำเพาะในซีรั่มของสัตว์ป่วย (สำหรับการวินิจฉัยโรคแท้งติดต่อ, peripneumonia, โรคต่อมน้ำเหลือง, โรคเลปโตสไปโรซีส, ทริปาโนโซโมซิส ฯลฯ ); 2) เพื่อระบุแอนติเจนที่จำเพาะ (แบคทีเรียหรือไวรัส) ในวัสดุทดสอบเมื่อมีซีรั่มภูมิคุ้มกันจำเพาะ

ในการดำเนินการ RSC จำเป็นต้องมี: ตัวอย่างซีรั่มที่ได้รับเพื่อการวิจัย; สองซีรั่มที่รู้กันว่าเป็นบวก (มาตรฐาน ให้ผลลัพธ์ที่เป็นบวก) และซีรั่มปกติสองรายการ เซรั่มทั้งหมดที่เจือจาง 1:10 จะถูกปิดใช้งานที่ 56...58 °C เป็นเวลา 30 นาที; แอนติเจนเจือจางตามไทเทอร์ ส่วนประกอบที่เจือจางตามการไตเตรทที่กำหนดไว้ระหว่างการไตเตรทในระบบสลายแบคทีเรีย ฮีโมไลซินในไทเทอร์ทำงาน เซลล์เม็ดเลือดแดงแกะ (I: 40); น้ำเกลือ ปิเปตตวง หลอดทดลอง ชั้นวาง อ่างน้ำ ที่อุณหภูมิ 37...38 °C

ก่อนดำเนินการ RSC เลือดแกะจะถูกช็อกไฟฟ้า ล้างเซลล์เม็ดเลือดแดงด้วยน้ำเกลือโดยการปั่นแยกจนกระทั่งส่วนเหนือตะกอนมีความโปร่งใสโดยสมบูรณ์ ซึ่งถูกดูดออก และเซลล์เม็ดเลือดแดงที่ตกตะกอนจะถูกเจือจางในน้ำเกลือ 1:40 (2.5%) . แอนติเจนจะถูกเจือจางตามไทเทอร์ที่ระบุบนฉลากโดยโรงงานชีวภาพ ฮีโมไลซินและส่วนประกอบเสริมจะถูกไตเตรตก่อนการจัดวาง RSC

แอนติเจนสำหรับ RSC เตรียมในโรงงานชีวภาพ โดยปกติแล้วสิ่งเหล่านี้จะเป็นสารสกัดจากสารแขวนลอยจุลินทรีย์ที่ถูกทำลาย (หรือเนื้อเยื่อที่มีไวรัส) แอนติเจนไม่ควรมีผลทำให้เม็ดเลือดแดงแตกซึ่งถูกควบคุมในระหว่างกระบวนการทำปฏิกิริยา (เทแอนติเจน 1...2 โดสและสารแขวนลอยเซลล์เม็ดเลือดแดง 0.5 มล. ลงในหลอดทดลอง: ไม่ควรมีภาวะเม็ดเลือดแดงแตก) ในหลอดบรรจุที่มีแอนติเจน โรงงานชีวภาพระบุว่ามีไว้สำหรับ RSC (สัปนายา โรคบรูเซลโลซิส หรืออื่นๆ) กล่องบรรจุภัณฑ์ระบุหมายเลขชุด วันที่ผลิต วันหมดอายุ กิจกรรมของแอนติเจน กล่าวคือ ควรใช้เจือจางเท่าใดเมื่อทำ RSC (1:100, 1:150 เป็นต้น) ในบางโรค วัสดุอื่นๆ ทำหน้าที่เป็นแอนติเจน ตัวอย่างเช่น ในการวินิจฉัยโรคเยื่อหุ้มปอดบวมในโค แอนติเจนของ CSC คือน้ำเหลืองของลูกโคที่ได้รับการทดลองติดเชื้อใต้ผิวหนังหรือในเยื่อหุ้มปอด ในระหว่างการเก็บรักษาแอนติเจนในระยะยาว จะมีการตรวจสอบไตเตรทอีกครั้งในห้องปฏิบัติการโดยใช้แผนการไตเตรทแบบพิเศษ

ซีรั่มทดสอบที่ได้รับสำหรับการวิจัยจะถูกเจือจางด้วยสารละลายทางสรีรวิทยา 1: 5 หรือ 1: 10 ซึ่งปิดใช้งานโดยการให้ความร้อนในอ่างน้ำเพื่อทำลายส่วนประกอบของตัวเองเป็นเวลา 30 นาทีที่ 56...58 °C (ซีรั่มของลา ล่อ ฮินนี - ที่อุณหภูมิ 61 °C)

เฮโมไลซินถูกเตรียมในโรงงานชีวภาพโดยการเพิ่มภูมิคุ้มกันให้กับกระต่ายด้วยเซลล์เม็ดเลือดแดงแกะที่ถูกล้าง ในการทำเช่นนี้ กระต่ายจะถูกฉีดเข้าเส้นเลือดดำโดยมีเซลล์เม็ดเลือดแดงแขวนลอย 40...50% 4...5 ครั้ง ในช่วงเวลา 2...3 วัน หนึ่งสัปดาห์หลังจากการฉีดครั้งสุดท้าย เลือดจะถูกพรากไปจากกระต่าย เซรั่มจะถูกสำลักฆ่าเชื้อ ปิดการใช้งาน เก็บรักษาด้วยกลีเซอรอล 1:1 หรือฟีนอล 0.5% ไตเตรทและเทลงในหลอด ในห้องปฏิบัติการ ก่อนการจัดเตรียม RSC จะถูกไทเทรตอีกครั้ง

แผนการไตเตรทของเฮโมลิซินมีความจำเป็นต้องเตรียม: i) เสริมการเจือจาง 1: 20; 2) เฮโมไลซิน 1:100 (เฮโมลิซิน 0.2 มล. + น้ำเกลือ 9.8 มล.); 3) การระงับเม็ดเลือดแดงแกะ 1:40; 4) สารละลาย NaCl ทางสรีรวิทยา

ในการตั้งค่าปฏิกิริยาการไตเตรท จะมีการวางหลอดทดลองสองแถวไว้บนขาตั้ง โดยหลอดหนึ่งเป็นหลอดเสริมสำหรับการเตรียมการเจือจางของเฮโมไลซินเท่านั้น ส่วนหลอดที่สองสำหรับการไทเทรตเอง การเจือจางครั้งแรกของเฮโมไลซินที่ 1:100 จะถูกเติมลงในหลอดแรกของแต่ละแถว จากนั้นจึงทำการเจือจางแบบอนุกรม หลอดทดลองทั้งหมดถูกเขย่าและวางในอ่างน้ำที่อุณหภูมิ 37...38°C เป็นเวลา 10...15 นาที การบัญชีสำหรับผลลัพธ์: ในตัวอย่างนี้ ปริมาณที่น้อยที่สุด (หรือการเจือจางสูงสุด) ที่ให้ภาวะเม็ดเลือดแดงแตกโดยสมบูรณ์คือ 1: 2000 นั่นคือ นี่คือระดับไตเตอร์จริง เครื่องไตเตรททำงานมีความเข้มข้นมากขึ้น 2 เท่า - 1:1000

0.5 มิลลิลิตร (ระบุด้วยลูกศร) ของการเจือจางแต่ละครั้งจากหลอดทดลองของแถวแรกจะถูกถ่ายโอนไปยังหลอดทดลองที่แยกจากกันของแถวที่สอง เติมส่วนประกอบเสริม 0.5 มล. (1:20) เม็ดเลือดแดงแกะ 0.5 มล. (สารแขวนลอย 2.5% หรือ 1:40) และน้ำเกลือ 1 มล. ลงในหลอดทดลองทั้งหมดของแถวที่สอง เพื่อให้ปริมาตรของของเหลวใน หลอดทดลองแต่ละหลอดมีขนาด 2.5 มล.

บันทึก. จากข้อเท็จจริงที่ว่าสูตรสุดท้ายของ RSC จะมีส่วนประกอบ 5 ชิ้น ชิ้นละ 0.5 มล. ซึ่งจะเท่ากับปริมาตร 2.5 มล. ปริมาตรนี้จะคงอยู่ตลอดงานทั้งหมด

เขย่าหลอดทดลองและวางลงในอ่างน้ำเป็นเวลา 10...15 นาที ภาวะเม็ดเลือดแดงแตกจะเกิดขึ้นในหลอดทดลองที่มีปริมาณเฮโมไลซินสูงเป็นหลัก (การเจือจางต่ำสุดคือ 1: 500, 1: 1000...) ฮีโมไลซินในปริมาณที่น้อยที่สุด (การเจือจางมากที่สุด) ที่ทำให้เกิดภาวะเม็ดเลือดแดงแตกโดยสมบูรณ์ภายใต้เงื่อนไขที่กำหนดเรียกว่า ขีดจำกัด (จริง) titerเฮโมลิซิน สำหรับงานต่อไปจะใช้เฮโมไลซินที่มีความเข้มข้นมากขึ้น 2 เท่านั่นคือเพิ่มไทเทอร์เป็นสองเท่าซึ่งเรียกว่าเป็นสองเท่าของปริมาณ ชื่อการทำงานตัวอย่างเช่น หากเครื่องไตเตรทที่แท้จริงคือ I: 2500 (หรือ 1: 2000) เครื่องไตเตรทการทำงานจะสอดคล้องกับการเจือจาง 1:1250 (หรือ 1: W00)

COMPLEMENT เป็นส่วนประกอบของเซรั่ม น้ำเหลือง ของเหลวในเนื้อเยื่อ ประเภทต่างๆสัตว์ (และมนุษย์); ค้นพบโดยบุชเนอร์ (ค.ศ. 1889) ในแมลงไม่มีส่วนเสริม ส่วนประกอบคือสารโปรตีนที่มีโครงสร้างที่ซับซ้อนซึ่งถูกปิดใช้งานอย่างรวดเร็วโดยการให้ความร้อน การเก็บรักษาในระยะยาว การสัมผัสกับรังสีอัลตราไวโอเลต การสั่นอย่างรุนแรง การกรองผ่านตัวกรองเซรามิก การเติมดินขาว กรด ด่าง แอลกอฮอล์ อะซิโตน คลอโรฟอร์ม กลั่น น้ำ แบคทีเรียแขวนลอย ฯลฯ สามารถเก็บรักษาส่วนประกอบเสริมได้โดยเติมโซเดียมซัลเฟต 5 กรัมและกรดบอริก 4 กรัมต่อซีรั่มหนูตะเภา 100 มล. กิจกรรมเสริมยังคงมีอยู่นานถึงหกเดือน วิธีที่ดีที่สุดการบรรจุกระป๋อง - การอบแห้งภายใต้สุญญากาศที่อุณหภูมิต่ำ (การทำให้แห้ง) ในหลอดที่ปิดสนิทในสถานะนี้จะคงอยู่เป็นเวลาสองปี ก่อนแต่ละขั้นตอน RSC กิจกรรมเสริมจะถูกตรวจสอบโดยการไตเตรท ซึ่งก็คือ การกำหนดไทเทอร์ - ปริมาณที่เหมาะสมที่สุดที่จำเป็นสำหรับปฏิกิริยาที่กำหนด ส่วนประกอบจะถูกไตเตรทสองครั้ง: ในระบบสลายเม็ดเลือดแดงแตกและสลายแบคทีเรีย

สำหรับ การไตเตรทของส่วนประกอบในระบบเม็ดเลือดแดงแตกเตรียมส่วนประกอบ: เสริมด้วยการเจือจาง 1:20 (อาหารเสริม 1 มล. + น้ำเกลือ 19 มล.) ฮีโมไลซินเจือจางตามระดับการทำงาน การระงับเม็ดเลือดแดงแกะล้าง (1:40) การแก้ปัญหาทางสรีรวิทยา วางหลอดทดลองบนขาตั้งและเทส่วนประกอบในปริมาณที่แตกต่างกันลงไปด้วยปิเปตแบบตวงที่ระยะห่าง 0.03 มล. (0.13; 0.16; 0.19; 0.22..: สูงถึง 0.43 มล.) จากนั้นเพิ่มส่วนประกอบที่เหลือ (รูปที่ 57) หลอดทดลองทั้งหมดถูกเขย่าและวางในอ่างน้ำที่อุณหภูมิ 37...38 °C เป็นเวลา 10...15 นาที จากนั้นจึงบันทึกผลลัพธ์ไว้

การบัญชีสำหรับผลลัพธ์: ส่วนเสริมในปริมาณที่น้อยที่สุดที่รับประกันภาวะเม็ดเลือดแดงแตกโดยสมบูรณ์ (ในตัวอย่างนี้ - 0.25 มล.) จะถูกใช้เป็นเครื่องไตเตรทเสริม

ผลการไทเทรตจะเริ่มนำมาพิจารณาในหลอดทดลองที่มีปริมาณส่วนประกอบเสริมสูงสุด ซึ่งคาดว่าจะเกิดภาวะเม็ดเลือดแดงแตกเป็นหลัก เรียกว่าส่วนประกอบเสริมจำนวนน้อยที่สุดที่ช่วยให้เกิดภาวะเม็ดเลือดแดงแตกอย่างสมบูรณ์ภายใต้เงื่อนไขที่กำหนด เสริมไทเตอร์ในระบบเม็ดเลือดแดงแตก

สำหรับ การไตเตรทของส่วนประกอบในระบบสลายแบคทีเรียจำเป็นต้องมีส่วนประกอบทั้งหมดของปฏิกิริยา: ส่วนประกอบ (1:20), เซลล์เม็ดเลือดแดง (1:40), ฮีโมไลซินในไทเทอร์ทำงาน, ซีรั่มบวกสองตัวและซีรั่มปกติสองตัว, แอนติเจนที่เฉพาะเจาะจง เซรั่มจะถูกเจือจางด้วยน้ำเกลือ 1:10 และปิดใช้งานเป็นเวลา 30 นาทีที่ 56...58 X เซรั่มแต่ละตัวจะเทลงในหลอดขนาด 0.5 มล. สองแถว สารเสริมจะถูกเติมลงในหลอดทดลองของแต่ละแถวในปริมาณที่เพิ่มขึ้น เช่น เมื่อไตเตรทในระบบเม็ดเลือดแดงแตก เริ่มต้นด้วยปริมาณที่ใช้สำหรับ titer ในระบบ hemolytic จากนั้นในแต่ละหลอดทดลองที่ตามมาปริมาณจะเพิ่มขึ้น 0.03 มล. โดยปรับระดับปริมาตรเป็น 0.5 มล. ด้วยสารละลายทางสรีรวิทยา

หลังจากนั้นจะมีการเติมแอนติเจน 0.5 มล. ลงในหลอดทดลองหนึ่งแถวที่มีซีรั่มบวกและปกติและเติมสารละลายทางสรีรวิทยา 0.5 มล. ในแถวที่สองของแต่ละซีรั่ม หลอดทดลองทั้งหมดถูกเขย่าและวางลงในอ่างน้ำเป็นเวลา 30...40 นาที จากนั้นเติมฮีโมลิซิน 0.5 มิลลิลิตรและเม็ดเลือดแดง 0.5 มิลลิลิตรลงในหลอดทดลองทั้งหมด เขย่าและวางอีกครั้งในอ่างน้ำเป็นเวลา 10...15 นาที ปริมาณส่วนประกอบที่น้อยที่สุดที่รับประกันการสลายของเซลล์เม็ดเลือดแดงโดยสมบูรณ์ในทั้งสองแถวของหลอดทดลอง (มีแอนติเจนและไม่มีแอนติเจน) ของซีรั่มปกติ 2 ซีรั่มในแถวเดียว (ไม่มีแอนติเจน) ของซีรั่มเชิงบวกแต่ละตัวและมีความล่าช้าโดยสมบูรณ์ (ไม่มี) ภาวะเม็ดเลือดแดงแตกในแถวของซีรั่มบวกกับแอนติเจน (ในปริมาณเท่ากันของส่วนประกอบเสริม) เรียกว่า ไทเทอร์เสริมซึ่งใช้ในการกำหนดประสบการณ์หลักของ RSC ในการศึกษาวินิจฉัย

ประสบการณ์หลักของ RSK (จริง ๆ แล้ว ทดสอบการวินิจฉัย- วางหลอดทดลองสองแถวไว้ในชั้นวางตามจำนวนตัวอย่างซีรั่มที่กำลังศึกษา 0.5 มล. ของซีรั่มที่ไม่ทำงานแต่ละหลอดจะถูกเทลงในหลอดทดลองสองหลอด: แอนติเจนจะถูกเพิ่มในหนึ่ง - 0.5 มล., อีกหลอดหนึ่ง (ไม่มีแอนติเจน) น้ำเกลือ 0.5 มล. และเมื่อเติมส่วนประกอบเสริมแล้วระบบแบคทีเรียจะถูกสร้างขึ้นจากนั้นจึงทำการสร้างเม็ดเลือดแดงแตก เพิ่ม

ส่วนประกอบที่จำเป็น: 1) เซรั่มทดสอบ, ปิดการใช้งาน, เจือจางด้วยสารละลายทางสรีรวิทยา 1: 10; 2) แอนติเจนจำเพาะที่เจือจางตามไทเทอร์ที่ระบุโดยโรงงานชีวภาพบนฉลากบรรจุภัณฑ์ 3) เสริมใน titer ที่กำหนด; 4) ฮีโมไลซินในไทเทอร์ทำงาน; 5) สารแขวนลอยของเม็ดเลือดแดงแกะที่ถูกล้าง 1: 40; 6) สารละลาย NaCl ทางสรีรวิทยา ซีรั่มทดสอบจะถูกเทลงในท่อสองแถว สำหรับซีรั่มทดสอบจำนวนเท่าใดก็ได้ จะใช้ซีรั่มเชิงบวกที่ทราบ (ซึ่งให้ผลลัพธ์ที่เป็นบวก) และเซรั่มปกติ (จากสัตว์ที่มีสุขภาพดีซึ่งให้ผลลัพธ์ที่เป็นลบ) จะถูกใช้เป็นตัวควบคุม

หลอดที่มีส่วนประกอบของระบบสลายแบคทีเรียจะถูกเขย่าและวางในอ่างน้ำเป็นเวลา 20...40 นาที ที่อุณหภูมิ 37...38°C หลอดทดลองของระบบสลายแบคทีเรียแถวที่สองที่ไม่มีแอนติเจนจะถูกเขย่าและวางในอ่างน้ำภายใต้สภาวะเดียวกัน

จากนั้นส่วนประกอบของระบบเม็ดเลือดแดงแตกจะถูกเติมลงในหลอดทดลองทั้งหมดของแถวที่หนึ่งและแถวที่สอง และวางครั้งที่สองในอ่างน้ำเป็นเวลา 10..15 นาที ในหลอดทั้งหมดของแถวที่สองที่ไม่มีแอนติเจนจะเกิดภาวะเม็ดเลือดแดงแตกโดยสมบูรณ์

ก่อนที่จะได้ผลลัพธ์สุดท้ายให้ปล่อยหลอดทดลองไว้ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 18...24 ชั่วโมง ในหลอดทดลองทั้งหมดที่ไม่มีแอนติเจนไม่ว่าซีรั่มจะได้มาจากสัตว์ที่ป่วยหรือมีสุขภาพดีก็ตามภาวะเม็ดเลือดแดงแตกควรเกิดขึ้นในช่วงแรก หลอดทดลองแถวที่มีแอนติเจนจะให้ผลลัพธ์ที่ชัดเจนยิ่งขึ้นเมื่อยืน

การอ่านค่าปฏิกิริยาในหลอดทดลองที่มีซีรั่มทดสอบจะถือว่าเชื่อถือได้หากไม่มีภาวะเม็ดเลือดแดงแตกในหลอดทดลองที่มีซีรั่มบวกและแอนติเจน โดยมีภาวะเม็ดเลือดแดงแตกสมบูรณ์ในหลอดทดลองที่มีซีรั่มบวกโดยไม่มีแอนติเจน และในหลอดทดลองทั้งหมดที่มีซีรั่มปกติอย่างเห็นได้ชัด (รูปที่ 61) ).

ปฏิกิริยานี้ต้องมาพร้อมกับการควบคุมแอนติเจน ส่วนประกอบเสริม ฮีโมไลซิน และเม็ดเลือดแดง เมื่อต้องการทำเช่นนี้ แอนติเจนที่มีเซลล์เม็ดเลือดแดงแกะจะถูกเทลงในหลอดทดลองที่แยกจากกัน เสริมด้วยเซลล์เม็ดเลือดแดงที่ไม่มีเฮโมลิซิน ฮีโมไลซินที่มีเซลล์เม็ดเลือดแดงโดยไม่มีส่วนประกอบ เม็ดเลือดแดงและน้ำเกลือ ปรับปริมาตรในแต่ละหลอดทดลองเป็น 2.5 มล. ด้วยน้ำเกลือ เขย่าหลอดทดลองและวางไว้ในอ่างน้ำที่อุณหภูมิ 37 °C เป็นเวลา 20 นาที ไม่ควรมีภาวะเม็ดเลือดแดงแตกในหลอดควบคุมทั้งหมด

ผลลัพธ์ของ RSKเป็นเรื่องปกติที่จะแสดงออกมาเป็น "ไม้กางเขน" ตัวชี้วัดผลปฏิกิริยาเชิงบวก: + + + + (///) - การตกตะกอนที่สมบูรณ์ของเม็ดเลือดแดง (ไม่มีภาวะเม็ดเลือดแดงแตก) ของเหลวเหนือตะกอนไม่มีสี + + + (///) - ของเหลวเหนือตะกอนมีสีเหลืองแทบจะสังเกตไม่เห็นเลย ผลลัพธ์ที่น่าสงสัยของปฏิกิริยา: การปรากฏตัวของเม็ดเลือดแดงเกาะอยู่ที่ด้านล่างและการย้อมสีบางส่วนของส่วนเหนือตะกอนเนื่องจากการสลายของเม็ดเลือดแดงบางส่วนถูกกำหนด + + - (++) นั่นคือไม้กางเขนสองและสองและครึ่ง . ภาวะเม็ดเลือดแดงแตกอย่างรุนแรง (ไม่มีตะกอน) หรือมีตะกอนเล็กน้อย (+) เป็นผลลบ

ปฏิกิริยาการตรึงส่วนเสริมระยะยาว (LDCR)มีประสิทธิภาพมากกว่าในเรื่องความไวซึ่งตรงกันข้ามกับ RSK แบบคลาสสิกทั่วไป สาระสำคัญของปฏิกิริยาคือ ระบบสลายแบคทีเรียจะคงอยู่ในสภาวะอุณหภูมิที่แตกต่างกันสามสภาวะ: หลังจากผสมส่วนประกอบที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 15 นาที จากนั้นที่อุณหภูมิต่ำ (4 °C) ในตู้เย็นเป็นเวลา 18...20 ชั่วโมง และใน อาบน้ำเป็นเวลา 15 นาที หลังจากนั้น ระบบเม็ดเลือดแดงแตกจะถูกเติม เขย่า แล้ววางอีกครั้งในอ่างน้ำ และปฏิกิริยาจะถูกบันทึก เช่นเดียวกับ RSC ประสิทธิผลของ RDSC ได้รับการยืนยันในการวินิจฉัยโรคติดเชื้อหลายชนิด (วัณโรค, vibriosis, brucellosis ฯลฯ )

ปฏิกิริยาปราบปรามการตรึงเสริม (CPF) หรือปฏิกิริยาการยับยั้ง FCC ทางอ้อมส่วนประกอบอีกประการหนึ่งเกี่ยวข้องกับปฏิกิริยานี้ - เซรั่มภูมิคุ้มกันมาตรฐานที่มีแอนติบอดีต่อแอนติเจนที่มักใช้ในการวินิจฉัยโรค ดังนั้น จึงเกิดปฏิกิริยาเชิงบวกใน CSC แบบคลาสสิก

เซรั่มทดสอบผสมกับแอนติเจนและปล่อยทิ้งไว้ระยะหนึ่งโดยไม่มีส่วนประกอบเสริม จากนั้นเติมซีรั่มเสริมและซีรั่มมาตรฐาน จากนั้นเขย่าหลอดและวางในอ่างน้ำเป็นเวลา 20...30 นาที หลังจากนั้นจึงเติมระบบเม็ดเลือดแดงแตกและวางอีกครั้งในอ่างน้ำ หากไม่มีภาวะเม็ดเลือดแดงแตกผลที่ได้จะเป็นลบเนื่องจากซีรั่มทดสอบไม่ทำปฏิกิริยากับแอนติเจนและอย่างหลังทำปฏิกิริยากับ เซรั่มมาตรฐาน, ส่วนเสริมที่มีผลผูกพัน หากซีรั่มทดสอบมาจากสัตว์ที่ป่วย จะมีแอนติบอดีจำเพาะที่เกี่ยวข้องกับแอนติเจน กล่าวคือ ปฏิกิริยาเกิดขึ้นระหว่างแอนติเจนและแอนติบอดีโดยไม่มีส่วนเสริมตรึง แอนติเจนที่ทำปฏิกิริยากับแอนติบอดีของซีรั่มทดสอบไม่ทำปฏิกิริยา (ระงับ) กับซีรั่มมาตรฐาน (ทราบเฉพาะ) ส่วนเสริมยังคงเป็นอิสระและทำปฏิกิริยาในระบบเม็ดเลือดแดงแตก - ภาวะเม็ดเลือดแดงแตกเกิดขึ้นผลของปฏิกิริยาเป็นบวกในความสัมพันธ์ ไปที่เซรั่มทดสอบ

วิธี แอนติบอดีเรืองแสง (MFA)ความสามารถของวิธีนี้เกิดจากความจำเพาะของปฏิกิริยาทางซีรั่มในระยะแรกซึ่งมีความไวสูงในการวิเคราะห์สารเรืองแสง ในการดำเนินการ MFA จำเป็นต้องมีซีรั่มเรืองแสงที่มีภูมิคุ้มกันจำเพาะสูง เป็นที่ทราบกันดีว่าในปฏิกิริยาทางซีรัมวิทยาต่างๆ ที่ใช้ในการปฏิบัติทางจุลชีววิทยา ส่วนประกอบหลักสามส่วนที่เกี่ยวข้อง ได้แก่ แอนติเจนของแบคทีเรีย แอนติบอดี และส่วนประกอบเสริม ในความเป็นจริงองค์ประกอบทั้งสามนั้นเป็นแอนติเจนและซีรั่มภูมิคุ้มกันต่อแต่ละองค์ประกอบดังนั้นจึงสามารถรับแอนติบอดีเรืองแสงได้ ขึ้นอยู่กับชนิดของเซรั่มเรืองแสงที่ใช้ (ต่อต้านแอนติเจนของแบคทีเรีย แอนติบอดีต้านเชื้อแบคทีเรีย ส่วนเสริม) วิธีแอนติบอดีเรืองแสงมีสามรูปแบบหลัก: ตัวแปรทางตรง (1) และทางอ้อม (2) และการดัดแปลงตัวแปรทางอ้อมโดยใช้ส่วนประกอบ ปฏิกิริยาทางภูมิคุ้มกันระหว่างแอนติเจนและแอนติบอดีจะดำเนินการในการปรับเปลี่ยนเหล่านี้โดยตรงบนสไลด์แก้ว ในการแก้ไขจุลินทรีย์จะใช้ตัวทำละลายอินทรีย์: อะซิโตน, เอทานอล, เมทานอล, ไดออกเซนรวมถึงสารตรึงทั่วไปที่ใช้ในการปฏิบัติทางจุลชีววิทยา: ฟอร์มาลิน, ส่วนผสมของ Nikiforov, ของเหลวของ Carnoy เป็นต้น

ตัวเลือกโดยตรง เซรั่มเรืองแสงเฉพาะจะถูกนำไปใช้กับสารเตรียมที่เสร็จแล้วในช่วงเวลาหนึ่ง จากนั้นเซรั่มส่วนเกินจะถูกระบายออก จากนั้นสารเตรียมจะถูกล้างและดูภายใต้กล้องจุลทรรศน์เรืองแสง วิธีนี้ใช้ในการตรวจจับแบคทีเรียในวัสดุและวัตถุทางพยาธิวิทยา สภาพแวดล้อมภายนอกตลอดจนการระบุเชื้อโรคในพืชผล

ตัวเลือกทางอ้อม (สองขั้นตอน) ในระยะแรกจะเกิดการผสมผสานเฉพาะของแอนติเจนกับแอนติบอดีที่สอดคล้องกันของซีรั่มที่ไม่มีป้ายกำกับ ในระยะที่สอง แอนติบอดีที่ไม่มีฉลากจำเพาะจะจับกับแอนติบอดีเรืองแสงต่อต้านสายพันธุ์ที่มีอยู่ในซีรั่มของสัตว์ที่ได้รับการสร้างภูมิคุ้มกันด้วยโกลบูลิน (หรือซีรัมเลือดครบส่วน) ของสปีชีส์ที่ใช้เซรั่มภูมิคุ้มกัน

ตัวเลือกต่อต้านการเสริมทางอ้อม (สามขั้นตอน) ขั้นแรก: การก่อตัวของสารเชิงซ้อนแอนติบอดีที่ไม่มีป้ายกำกับแอนติเจน ขั้นตอนที่สอง: การทาเซรั่มปกติที่มีส่วนประกอบเสริมเป็นชั้นๆ ขั้นตอนที่สาม: คอมเพล็กซ์การเสริมแอนติเจน - แอนติบอดี - แอนติบอดีจะได้รับการรักษาด้วยซีรั่มต่อต้านการเสริมเรืองแสงที่เตรียมโดยการฉีดวัคซีนให้กระต่ายด้วยซีรั่มของสายพันธุ์สัตว์ที่ทำหน้าที่เป็นแหล่งที่มาของการเสริม

ตัวแปรทางอ้อมของ MFA สามารถใช้ทั้งในการตรวจหาแอนติเจนและการตรวจหาแอนติบอดี นอกจากนี้ ในการตั้งค่าตัวเลือกสองขั้นตอน คุณจะต้องมีชุดเซรั่มเรืองแสงต่อต้านสายพันธุ์จำนวนจำกัด (ต่อต้านวัว แกะ ม้า หมู ฯลฯ โกลบูลิน) และสำหรับตัวเลือกต่อต้านเสริม ก็คือ เพียงพอที่จะมีซีรั่มเรืองแสงเพียงหนึ่งเดียวต่อโกลบูลินหนูตะเภา

วิธีการตรวจภูมิคุ้มกันและกล้องจุลทรรศน์ ในการปฏิบัติงานของห้องปฏิบัติการแบคทีเรียวิทยาทางสัตวแพทย์จะใช้ซีรั่มเรืองแสงที่ผลิตจากสิ่งมีชีวิต เซรั่มเรืองแสงจะให้แสงสีเขียวแก่วัตถุ (สีย้อมจากฟลูออเรสเซนต์) หรือเรืองแสงสีแดง (สีย้อมจากโรดามีน) ทั้งนี้ขึ้นอยู่กับประเภทของฟลูออโรโครม

ในการทำการตรวจด้วยกล้องจุลทรรศน์อิมมูโนลูมิเนสเซนท์ ควรใช้วัสดุที่จะตรวจสอบกับกระจกสไลด์ที่บางและปราศจากคราบมัน เมื่อศึกษาอวัยวะและเนื้อเยื่อของสัตว์ จะมีการเตรียมลายนิ้วมือเป็นชั้นบางๆ การเตรียมการจะถูกทำให้แห้งในอากาศและวางไว้ในของเหลวที่ยึดติด (เอทานอล - 15 นาที, เมทานอล - 5 นาที, อะซิโตน - 5 นาที) หากจำเป็นหลังจากการตรึงแล้วสามารถเก็บการเตรียมการไว้ในตู้เย็นได้ระยะหนึ่ง ลำดับและขั้นตอนเพิ่มเติมขึ้นอยู่กับเวอร์ชันของ MFA ที่ใช้ (ขั้นตอนเดียว สองขั้นตอน สามขั้นตอน) การบำบัดสารปรุงแต่งด้วยซีรั่มเรืองแสง รวมถึงซีรั่มระยะแรกและส่วนประกอบเสริมที่ไม่มีป้ายกำกับ จะดำเนินการที่อุณหภูมิ 37°C ในห้องชื้น (จานเพาะเชื้อพร้อมกระดาษกรองชุบน้ำ)

ตัวเลือกขั้นตอนเดียวเซรั่มเรืองแสงถูกนำไปใช้กับสไลด์แก้วที่มีวัสดุทดสอบคงที่ (ในการเจือจางที่ระบุบนหลอด) วางยาไว้ในห้องชื้นเป็นเวลา 15...20 นาทีที่อุณหภูมิ 37 "C จากนั้นล้างด้วยน้ำเกลือบัฟเฟอร์ (pH 7.4) ในภาชนะ เปลี่ยนสารละลายหลังจาก 5...10 นาที หลายครั้ง หรือเปิดน้ำประปาทิ้งไว้ 3...5 นาที น้ำควรเป็นกลางและปราศจากเหล็ก จากนั้น ส่วนผสม (อาจมีรอยเปื้อนหลายรอยบนแก้วเดียว) นำไปตากในอากาศหรือด้วยกระดาษกรอง ของกลีเซอรอลบัฟเฟอร์ที่มีค่า pH 8.0 ถูกทาและคลุมด้วยแผ่นปิด ของเหลวแช่ที่ไม่ใช่ฟลูออเรสเซนต์ถูกนำไปใช้กับแผ่นปิดและตรวจสอบด้วยกล้องจุลทรรศน์

ตัวเลือกสองขั้นตอนหยดเซรั่มภูมิคุ้มกันระยะแรกที่ไม่มีฉลากลงบนสไลด์แก้วที่มีวัสดุทดสอบ วางยาไว้ในเทอร์โมสตัทในห้องชื้นเป็นเวลา 15...20 นาที จากนั้นนำไปล้างตามที่อธิบายไว้ข้างต้น เช็ดให้แห้ง และใช้เซรั่มต่อต้านสายพันธุ์เรืองแสงหยดหนึ่ง วางยาอีกครั้งในเทอร์โมสตัทในห้องชื้นเป็นเวลา 15...20 นาที ทำซ้ำขั้นตอนการซักและทำให้แห้งด้วยกระดาษกรอง ใช้กลีเซอรอลบัฟเฟอร์ คลุมด้วยแผ่นปิด ใช้ของเหลวแช่ที่ไม่ใช่ฟลูออเรสเซนต์ และตรวจสอบด้วยกล้องจุลทรรศน์

ตัวเลือกสามขั้นตอน (ต่อต้านเสริม)หยดเซรั่มภูมิคุ้มกันระยะแรกที่ไม่มีฉลากลงบนสไลด์แก้วที่มีวัสดุทดสอบ ยาถูกวางไว้ในเทอร์โมสตัทตามที่อธิบายไว้ข้างต้น ทำให้แห้ง และหยดส่วนประกอบเสริมลงบนสเมียร์ ยาจะถูกวางอีกครั้งในห้องที่มีความชื้นและอยู่ในเทอร์โมสตัทเป็นเวลา 15...20 นาที หลังจากนั้นจึงนำไปล้างและใช้เซรั่มต่อต้านสารเสริมเรืองแสง ขั้นตอนที่ตามมาจะคล้ายกับตัวเลือกขั้นตอนเดียว

การเตรียมและการประมวลผลการเตรียมการควบคุม 1. สำหรับตัวเลือกโดยตรง เพื่อตรวจสอบความจำเพาะของปฏิกิริยาระหว่างแอนติเจนและซีรั่มเรืองแสง การเตรียมสเมียร์จากจุลินทรีย์สายพันธุ์ต่างชนิดกันควรได้รับการบำบัดด้วยซีรั่มเดียวกัน สปีชีส์เหล่านี้จะต้องมีความคล้ายคลึงกันทางแอนติเจน แต่มีความแตกต่างทางสัณฐานวิทยาจากจุลินทรีย์ที่กำลังศึกษา แอนติเจนอยู่ห่างจากจุลินทรีย์ที่กำลังศึกษาอยู่ แต่มีลักษณะทางสัณฐานวิทยาและการกระจายตัวคล้ายคลึงกัน การเตรียมรอยประทับจะได้รับการรักษาด้วยซีรั่มปกติเรืองแสง

2. สำหรับตัวเลือกทางอ้อม จำเป็นต้องมีการเตรียมการควบคุมสามชนิดที่รักษาด้วยเซรั่มปกติ เซรั่มต่อต้านสายพันธุ์เรืองแสงที่ไม่มีเซรั่มที่ไม่มีฉลากภูมิคุ้มกัน และเซรั่มต่อต้านสายพันธุ์เรืองแสงที่มีเซรั่มภูมิคุ้มกันที่รู้จักในระยะแรก

3. สำหรับตัวเลือกทางอ้อม พร้อมด้วยส่วนเสริมจำเป็นต้องมีการเตรียมการควบคุม ในระหว่างการรักษาโดยแทนที่เซรั่มภูมิคุ้มกันด้วยเซรั่มปกติประเภทเดียวกันและในการเจือจางเดียวกัน รวมถึงการเตรียมการรักษาด้วยส่วนผสมทั้งหมดยกเว้นเซรั่มภูมิคุ้มกัน

การประเมินผล โดยคำนึงถึงความสว่าง สี ตำแหน่ง และโครงสร้างของแสงเรืองแสงด้วย แบคทีเรียที่ย้อมด้วยเซรั่มเรืองแสงที่มีป้ายกำกับด้วยฟลูออเรสซีนไอโซไทโอไซยาเนตจะมีแสงสีเขียวสดใสตามแนวขอบในรูปแบบของขอบหรือรัศมีส่วนตรงกลางจะเรืองแสงเล็กน้อย การเรืองแสงนี้เรียกว่าเฉพาะเจาะจง ตรงกันข้ามกับการไม่เฉพาะเจาะจง เมื่อทั้งเซลล์ร่างกายเรืองแสงสม่ำเสมอ ยิ่งเซลล์แบคทีเรียอยู่ในสารเตรียมอย่างเด่นชัดมากเท่าไร ขอบก็จะยิ่งแหลมมากขึ้นเท่านั้น แสงนี้สามารถอธิบายได้ด้วยความจริงที่ว่าจากพื้นที่หน่วยของ "รอบนอก" ของเซลล์หลายเท่าของแอนติบอดีถูกฉายลงบนเรตินาของดวงตาของผู้สังเกตมากกว่าจากส่วนกลางของเซลล์จุลินทรีย์ โปรดทราบว่าเซลล์พลาสติก (เลปโตสไปร์, ไวบริโอ) ไม่มีรูปร่างหรือสังเกตเห็นได้ชัดเจนเล็กน้อย ในเซลล์ที่แช่อยู่ในของเหลวในเนื้อเยื่อและในแบคทีเรียบาซิลลัสของแอนแทรกซ์อายุน้อย โครงร่างมักจะไม่ชัดเจน

ประเมินความเข้มของการเรืองแสงโดยใช้ระบบสี่กากบาท: + + + + - การเรืองแสงที่สว่างมากบริเวณรอบนอกของเซลล์จุลินทรีย์ซึ่งตัดกันอย่างชัดเจนกับส่วนสีเข้มของเซลล์ + + + - การเรืองแสงที่สดใสของขอบเซลล์ + + - การเรืองแสงที่อ่อนแอของขอบเซลล์ + - ไม่มีแสงตัดกันที่ขอบของเซลล์จุลินทรีย์ การไม่มีแสงเฉพาะเจาะจงจะแสดงด้วยเครื่องหมาย "-" (มองเห็นเงาของจุลินทรีย์) เมื่อวินิจฉัยเชื้อโรคต่าง ๆ ผลลัพธ์ที่เป็นบวกมักถูกพิจารณาว่าเป็นการเรืองแสงของเซลล์แบคทีเรียอย่างน้อยสี่หรือสามกากบาท

61. ปฏิกิริยาที่เกี่ยวข้องกับส่วนเสริม ปฏิกิริยาการตรึงส่วนเสริม กลไก ส่วนประกอบ วิธีการติดตั้ง การใช้งาน ปฏิกิริยาเม็ดเลือดแดงแตกในแนวรัศมี

ปฏิกิริยาที่เกี่ยวข้องกับส่วนเติมเต็ม

ปฏิกิริยาที่เกี่ยวข้องกับส่วนเติมเต็มขึ้นอยู่กับการกระตุ้นคอมพลีเมนท์โดยแอนติเจน-แอนติบอดีเชิงซ้อน (ปฏิกิริยาการตรึงคอมพลีเมนต์, ภาวะเม็ดเลือดแดงแตกในแนวรัศมี ฯลฯ)

ปฏิกิริยาการตรึงส่วนเสริม (อาร์เอสเค) คือเมื่อแอนติเจนและแอนติบอดีสอดคล้องกัน พวกมันจะก่อให้เกิดภูมิคุ้มกันที่ซับซ้อน ซึ่งผ่านทางนั้นเอฟซี -ชิ้นส่วนแอนติบอดีติดอยู่กับส่วนเติมเต็ม (C) กล่าวคือ ส่วนเติมเต็มถูกจับกันโดยสารเชิงซ้อนแอนติเจน-แอนติบอดี หากไม่มีการสร้างสารเชิงซ้อนของแอนติเจนและแอนติบอดี ส่วนประกอบจะยังคงเป็นอิสระ (รูปที่ 13.8) RSK ดำเนินการในสองขั้นตอน: ระยะที่ 1 - การฟักตัวของส่วนผสมที่มีแอนติเจน + แอนติบอดี + ส่วนประกอบสามองค์ประกอบ; ระยะที่ 2 (ตัวบ่งชี้) - การตรวจหาส่วนประกอบอิสระในส่วนผสมโดยเพิ่มระบบเม็ดเลือดแดงแตกซึ่งประกอบด้วยเม็ดเลือดแดงแกะและซีรั่มเม็ดเลือดแดงที่มีแอนติบอดีต่อพวกมัน ในระยะที่ 1 ของปฏิกิริยา เมื่อคอมเพล็กซ์แอนติเจน-แอนติบอดีถูกสร้างขึ้น ส่วนประกอบจะจับกัน จากนั้นในระยะที่ 2 เม็ดเลือดแดงแตกของเม็ดเลือดแดงที่ไวโดยแอนติบอดีจะไม่เกิดขึ้น ปฏิกิริยาเป็นบวก หากแอนติเจนและแอนติบอดีไม่ตรงกัน (ไม่มีแอนติเจนหรือแอนติบอดีในตัวอย่างทดสอบ) ส่วนเสริมจะยังคงเป็นอิสระและในระยะที่ 2 จะเข้าร่วมกับเม็ดเลือดแดง - แอนติบอดีต่อต้านเม็ดเลือดแดงที่ซับซ้อนทำให้เกิดภาวะเม็ดเลือดแดงแตก ปฏิกิริยาเป็นลบ

RSC ใช้ในการวินิจฉัยโรคติดเชื้อหลายชนิด โดยเฉพาะซิฟิลิส (ปฏิกิริยา Wassermann)

ปฏิกิริยานี้ใช้ในการตรวจหาแอนติบอดีในซีรั่มในเลือดของผู้ป่วยที่ติดเชื้อแบคทีเรีย ไวรัส โปรโตซัว ตลอดจนระบุและพิมพ์ไวรัสที่แยกได้จากผู้ป่วย RSC หมายถึงปฏิกิริยาทางเซรุ่มวิทยาที่ซับซ้อน ซึ่งนอกเหนือจากแอนติเจน แอนติบอดี และส่วนประกอบเสริมแล้ว ระบบเม็ดเลือดแดงยังมีส่วนร่วมอีกด้วย ซึ่งเผยให้เห็นผลลัพธ์ของปฏิกิริยา RSC ดำเนินการในสองขั้นตอน: ระยะแรกคือปฏิสัมพันธ์ของแอนติเจนกับแอนติบอดีโดยมีส่วนร่วมของส่วนประกอบ และระยะที่สองคือการระบุระดับของการจับส่วนประกอบโดยใช้ระบบเม็ดเลือดแดงแตก ระบบนี้ประกอบด้วยเซลล์เม็ดเลือดแดงแกะและเซรั่มเม็ดเลือดแดงแตกที่ได้จากการสร้างภูมิคุ้มกันให้กับสัตว์ทดลองด้วยเซลล์เม็ดเลือดแดง เม็ดเลือดแดงได้รับการประมวลผล - ทำให้ไวโดยเติมซีรั่มลงไปที่อุณหภูมิ 37°C เป็นเวลา 30 นาที การสลายของเม็ดเลือดแดงแกะที่ไวต่อแสงจะเกิดขึ้นเฉพาะในกรณีที่พวกมันเข้าร่วมกับระบบเสริมเม็ดเลือดแดง ในกรณีที่ไม่มีเซลล์เม็ดเลือดแดงจะไม่เปลี่ยนแปลง ผลลัพธ์ของ RSC ขึ้นอยู่กับการมีอยู่ของแอนติบอดีในซีรั่มทดสอบ หากซีรั่มมีแอนติบอดีที่คล้ายคลึงกับแอนติเจนที่ใช้ในปฏิกิริยา ดังนั้นแอนติเจนและแอนติบอดีที่เกิดขึ้นจะจับและยึดส่วนเสริม เมื่อเพิ่มระบบเม็ดเลือดแดงแตกในกรณีนี้จะไม่เกิดภาวะเม็ดเลือดแดงแตกเนื่องจากส่วนประกอบทั้งหมดถูกใช้ไปกับการเชื่อมต่อเฉพาะของแอนติเจนและแอนติบอดีที่ซับซ้อน เซลล์เม็ดเลือดแดงยังคงไม่เปลี่ยนแปลง ดังนั้นการไม่มีภาวะเม็ดเลือดแดงแตกในหลอดทดลองจะถูกบันทึกเป็นเม็ดเลือดแดงที่เป็นบวก ในกรณีที่ไม่มีแอนติบอดีที่สอดคล้องกับแอนติเจนในซีรั่ม สารเชิงซ้อนของแอนติเจน-แอนติบอดีจำเพาะจะไม่เกิดขึ้นและส่วนประกอบจะยังคงเป็นอิสระ เมื่อเพิ่มระบบเม็ดเลือดแดงแตกเข้าไป ส่วนเสริมจะเกาะติดกับระบบเม็ดเลือดแดงและทำให้เม็ดเลือดแดงแตก การทำลายเซลล์เม็ดเลือดแดงและภาวะเม็ดเลือดแดงแตกทำให้เกิดปฏิกิริยาเชิงลบ

ในการตรวจ RSC จำเป็นต้องมีสิ่งต่อไปนี้: ซีรั่มของผู้ป่วย, ส่วนเสริม, ระบบเม็ดเลือดแดงแตกที่ประกอบด้วยเม็ดเลือดแดงแกะและซีรั่มเม็ดเลือดแดงแตก รวมถึงสารละลายไอโซโทนิกโซเดียมคลอไรด์ ปฏิกิริยาจะดำเนินการในหลอดเซรุ่มวิทยา เซลล์เม็ดเลือดแดงแกะได้มาจากเลือดแกะที่ผ่านการละลายฟองโดยการล้างเซลล์เหล่านั้นสามครั้งด้วยสารละลายไอโซโทนิกโซเดียมคลอไรด์ เซรั่ม Hemolytic ผลิตขึ้นสำเร็จรูปในหลอดซึ่งมีฉลากระบุระดับ titer นั่นคือการเจือจางสูงสุดของซีรั่มซึ่งยังคงทำให้เกิดภาวะเม็ดเลือดแดงแตกเมื่อเพิ่มเข้าไปในเซลล์เม็ดเลือดแดงเมื่อมีส่วนประกอบเสริม เซรั่มเม็ดเลือดแดงแตกได้มาจากการสร้างภูมิคุ้มกันให้กับสัตว์ เช่น กระต่าย ด้วยเซลล์เม็ดเลือดแดงของแกะ เมื่อตั้งค่าปฏิกิริยา เซรั่มจะถูกใช้ในระดับไทเทอร์สามระดับ ตัวอย่างเช่น titer ของซีรั่ม hemolytic คือ 1: 1200 และการเจือจางการทำงานคือ 1: 400 ใช้ซีรั่มเลือดหนูตะเภาสด (ภายใน 24-48 ชั่วโมง) หรือส่วนประกอบแบบแห้งในหลอดบรรจุเป็นส่วนประกอบ ก่อนดำเนินการ RSC ส่วนประกอบเสริมจะถูกเจือจาง 1:10 และไตเตรทเพื่อสร้างไทเตอร์ ซึ่งเป็นปริมาณที่น้อยที่สุดของส่วนประกอบเสริมที่เกิดจากการสลายเม็ดเลือดแดงของเม็ดเลือดแดงเมื่อรวมกับระบบเม็ดเลือดแดงที่ใช้ในปฏิกิริยานี้ เมื่อพิจารณาถึงคุณสมบัติต่อต้านการเสริมที่เป็นไปได้ของแอนติเจน เมื่อแสดงปฏิกิริยา จะมีการเพิ่มขึ้น 20-30% ให้กับไทเทอร์การทำงานที่กำหนดไว้ของส่วนประกอบเสริม
แอนติเจนของ RSC คือสารแขวนลอยของแบคทีเรียที่ถูกฆ่า สารสกัดที่เตรียมจากสารแขวนลอยเหล่านี้ และเศษส่วนทางเคมีของจุลินทรีย์แต่ละตัว ข้อกำหนดหลักสำหรับแอนติเจนคือการไม่มีการยับยั้งการทำงานของส่วนประกอบ ไม่ควรมีคุณสมบัติต่อต้านการเสริม เพื่อระบุคุณสมบัติเหล่านี้ของแอนติเจน ส่วนประกอบจะถูกไตเตรทเพิ่มเติมเมื่อมีแอนติเจนที่ใช้ในปฏิกิริยา มีแผนการบางอย่างสำหรับการแสดงละคร RSC ผลของปฏิกิริยาจะถูกนำมาพิจารณาโดยการมีหรือไม่มีภาวะเม็ดเลือดแดงแตกของเม็ดเลือดแดงในระบบเม็ดเลือดแดงแตก RSC ใช้ในการวินิจฉัยโรคซิฟิลิส (ปฏิกิริยา Wassermann), โรคหนองใน (ปฏิกิริยา Bordet-Gengou), โรคท็อกโซพลาสโมซิส, โรคริกเก็ตเซียลและไวรัส

ปฏิกิริยาเม็ดเลือดแดงแตกในแนวรัศมี (RRH) ) วางไว้ในบ่อของเจลวุ้นที่มีเซลล์เม็ดเลือดแดงแกะและส่วนประกอบเสริม หลังจากแนะนำเซรั่มเม็ดเลือดแดงแตก (แอนติบอดีต่อเซลล์เม็ดเลือดแดงแกะ) เข้าไปในบ่อของเจล โซนของเม็ดเลือดแดงแตกจะเกิดขึ้นรอบตัวพวกเขา (อันเป็นผลมาจากการแพร่กระจายในแนวรัศมีของแอนติบอดี) ด้วยวิธีนี้จึงเป็นไปได้ที่จะตรวจสอบกิจกรรมของส่วนประกอบเสริมและซีรั่มเม็ดเลือดแดงแตกรวมถึงแอนติบอดีในซีรั่มในเลือดของผู้ป่วยไข้หวัดใหญ่, หัดเยอรมัน, โรคไข้สมองอักเสบจากเห็บ- ในการทำเช่นนี้ แอนติเจนที่เกี่ยวข้องของไวรัสจะถูกดูดซับบนเม็ดเลือดแดง และซีรั่มเลือดของผู้ป่วยจะถูกเพิ่มเข้าไปในหลุมของเจลที่มีเม็ดเลือดแดงเหล่านี้ แอนติบอดีต้านไวรัสจะทำปฏิกิริยากับแอนติเจนของไวรัสที่ถูกดูดซับบนเม็ดเลือดแดง หลังจากนั้นส่วนประกอบเสริมจะเข้าร่วมกับคอมเพล็กซ์นี้ ทำให้เกิดภาวะเม็ดเลือดแดงแตก

ปฏิกิริยาการตรึงส่วนเสริม (CFR) และปฏิกิริยาการตรึงส่วนเติมเต็มในระยะยาว (LCR)

ปฏิกิริยาการตรึงส่วนประกอบ (ปฏิกิริยาการตรึงส่วนเสริม)

ปฏิกิริยาการแก้ไขที่สมบูรณ์, RSK, ปฏิกิริยา Bordet-Zhangu [ตั้งชื่อตามนักแบคทีเรียวิทยา J. Bordet และ O. Gengou, 1901] ทางซีรั่มวิทยาที่มีความเฉพาะเจาะจงสูงและละเอียดอ่อนมาก ปฏิกิริยาขึ้นอยู่กับคุณสมบัติของสารเชิงซ้อนแอนติเจน-แอนติบอดีเพื่อแก้ไขส่วนประกอบอิสระ

ส่วนเสริม (ระบบส่วนเสริม) (จากภาษาละติน ส่วนเติมเต็ม - การบวก) กลุ่ม โปรตีนทรงกลมซีรั่มเลือดของสัตว์และมนุษย์เป็นตัวแทนส่วนหนึ่ง ระบบภูมิคุ้มกันร่างกาย. เมื่อติดเชื้อแบคทีเรียหรือไวรัส สารพิษบางชนิด หรือลักษณะที่ปรากฏของเซลล์ที่ถูกเปลี่ยนแปลงเข้าสู่ร่างกาย การกระตุ้นเสริมจะเกิดขึ้น ซึ่งส่งผลให้เซลล์เป้าหมายถูกทำลาย (ถูกทำลาย) และสารพิษและไวรัสจะถูกทำให้เป็นกลาง ดังนั้นระบบเสริมจึงถือเป็นแนวหน้าในการป้องกันภูมิคุ้มกันของร่างกายพร้อมกับมาโครฟาจ

ปฏิกิริยานี้ใช้กันอย่างแพร่หลายในการระบุแอนติเจนและในการวินิจฉัยการติดเชื้อโดยเฉพาะอย่างยิ่งโรคที่เกิดจากสไปโรเชต (ปฏิกิริยา Wassermann) ริกเก็ตเซียและไวรัส

RSC เป็นปฏิกิริยาทางซีรัมวิทยาที่ซับซ้อน มันเกี่ยวข้องกับส่วนประกอบและระบบแอนติเจนและแอนติบอดีสองระบบ โดยพื้นฐานแล้วนี่คือปฏิกิริยาทางเซรุ่มวิทยาสองประการ

ระบบแรก - ระบบหลักประกอบด้วยแอนติเจนและแอนติบอดี (ระบบหนึ่งเป็นที่รู้จัก แต่อีกระบบหนึ่งไม่ใช่) มีการเพิ่มส่วนเสริมจำนวนหนึ่งลงไป หากแอนติเจนและแอนติบอดีของระบบนี้ตรงกัน พวกมันจะเชื่อมต่อและจับส่วนเติมเต็ม คอมเพล็กซ์ที่เกิดขึ้นจะกระจัดกระจายอย่างประณีตและมองไม่เห็น

เสริม serodiagnosis ปฏิกิริยาการตรึง

ตรวจพบการก่อตัวของสารเชิงซ้อนนี้โดยใช้ระบบเม็ดเลือดแดงแตกหรือตัวบ่งชี้ที่สอง ประกอบด้วยเซลล์เม็ดเลือดแดงแกะ (แอนติเจน) และซีรั่มเม็ดเลือดแดงแตก (แอนติบอดี) ที่เกี่ยวข้อง เช่น คอมเพล็กซ์ภูมิคุ้มกันสำเร็จรูป ในระบบนี้ การสลายของเซลล์เม็ดเลือดแดงสามารถเกิดขึ้นได้เมื่อมีส่วนประกอบเสริมเท่านั้น หากส่วนประกอบเสริมถูกผูกมัดโดยระบบแรก (หากแอนติเจนและแอนติบอดีสอดคล้องกัน) จากนั้นในระบบที่สองก็จะไม่มีภาวะเม็ดเลือดแดงแตกเนื่องจากไม่มีส่วนประกอบอิสระ การไม่มีภาวะเม็ดเลือดแดงแตก (เนื้อหาของหลอดมีเมฆมากหรือมีตะกอนของเม็ดเลือดแดงที่ด้านล่าง) จะถูกบันทึกเป็นผลบวกของ RSC

หากในระบบแรกแอนติเจนไม่ตรงกับแอนติบอดี ภูมิคุ้มกันที่ซับซ้อนจะไม่ก่อตัวและส่วนประกอบจะยังคงเป็นอิสระ ส่วนเสริมที่เหลืออยู่จะมีส่วนร่วมในระบบที่สองทำให้เกิดภาวะเม็ดเลือดแดงแตก - ผลลัพธ์ของ RSC จะเป็นลบ (เนื้อหาของหลอดมีความโปร่งใส - "เลือดเคลือบ")

ส่วนประกอบของปฏิกิริยาการตรึงเสริม:

1. แอนติเจน - มักจะ lysate, แยก, hapten; ไม่ค่อยมีการแขวนลอยของจุลินทรีย์

2. แอนติบอดี - เซรั่มผู้ป่วย

3. ส่วนประกอบ - เซรั่ม หนูตะเภา

4.แอนติเจน-เม็ดเลือดแดงแกะ ระบบเม็ดเลือดแดงแตก

5. แอนติบอดี - เฮโมไลซินในการแกะเม็ดเลือดแดง

6. สารละลายไอโซโทนิก

การเตรียมส่วนผสม

1. เซรั่มจะเจือจางน้อยกว่าไทเทอร์ 3 เท่า เตรียมการเจือจางทั่วไปของซีรั่มสำหรับการทดลองทั้งหมด โดยปริมาตรจะถูกกำหนดโดยการคูณปริมาตรของซีรั่มในหลอดทดลองหนึ่งหลอด (เช่น 0.5 มล.) ด้วยจำนวนหลอดทดลอง ซึ่งเกินจำนวนในการทดลองเล็กน้อย ของเหลวส่วนเกินเป็นสิ่งจำเป็นในการเตรียมส่วนประกอบทั้งหมดของปฏิกิริยา โดยบางส่วนยังคงอยู่บนผนังของหลอดทดลอง ขวดทดลอง และปิเปต ปริมาตรของฮีโมลิซินที่เจือจางและสารแขวนลอยของเม็ดเลือดแดง โดยเติมซีรั่มลงในเม็ดเลือดแดง จะถูกผสมอย่างทั่วถึงและบ่มเป็นเวลา 30 นาทีที่ 37°C (ทำให้ไว)

2.เม็ดเลือดแดงแกะ เตรียมสารแขวนลอยของเม็ดเลือดแดงแกะที่ล้างแล้ว 3% สำหรับจำนวนหลอดทดลองทั้งหมดในการทดลอง เพื่อเตรียมระบบเม็ดเลือดแดงแตก 30 นาทีก่อนนำเข้าสู่การทดลอง จะมีการผสมเม็ดเลือดแดงแกะในปริมาณที่เท่ากันกับแอนติบอดี

3. ส่วนประกอบมักจะเจือจางในอัตราส่วน 1:10 ต้องไตเตรตก่อนการทดลองแต่ละครั้ง เครื่องไตเตรทเสริมคือปริมาณที่น้อยที่สุด เมื่อเติมลงในระบบเม็ดเลือดแดงแตก ภาวะเม็ดเลือดแดงแตกโดยสมบูรณ์จะเกิดขึ้นภายใน 1 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37°C

4. โดยทั่วไปแล้วแอนติเจนจะได้รับพร้อมทำโดยระบุระดับไทเทอร์ เช่น ปริมาณที่หลังจากเจือจางแอนติเจนแล้วควรมีอยู่ใน 1 มิลลิลิตร ตัวอย่างเช่น ด้วยไทเทอร์ 0.4 จะถูกเจือจางในสารละลายไอโซโทนิก 0.96 มิลลิลิตร นำแอนติเจนจำนวนเท่ากับครึ่งหนึ่งของไทเทอร์ (0.5 มล.) เข้าสู่การทดลอง นี่คือปริมาณการทำงานของเขา เตรียมการเจือจางแอนติเจนทั่วไปสำหรับการทดลองทั้งหมด โดยคูณ 0.5 มิลลิลิตรด้วยจำนวนหลอดทดลองในการทดลอง

5. แอนติบอดี - เซรั่มของผู้ป่วย เซรั่มสดจะถูกปิดใช้งานก่อนการทดลองเพื่อทำลายส่วนประกอบที่มีอยู่ในนั้น ในการดำเนินการนี้ ให้ทำความร้อนเป็นเวลา 30 นาทีที่ 56°C ในอ่างน้ำหรือในเครื่องยับยั้งการทำงานด้วยเทอร์โมสตัท วิธีหลังเป็นวิธีที่ดีกว่า: ช่วยลดโอกาสที่จะเกิดความร้อนสูงเกินไป

การตั้งค่าปฏิกิริยาการตรึงส่วนเสริม (CFR)

ปฏิกิริยาจะดำเนินการในปริมาตร 1 ลูกบาศก์เมตร ซม. (0.2 ซีซี ของแต่ละส่วนประกอบ)

ซีรั่มทดสอบจะถูกตรวจสอบที่การเจือจาง 1: 5 และ 1: 10 (ขนาดซีรั่ม 0.04 ซีซีและ 0.02 ซีซีด้วยแอนติเจนจำเพาะที่การเจือจาง 1: 5 ด้วยแอนติเจนควบคุม (สำหรับความจำเพาะ) และไม่มีแอนติเจน (สำหรับการต่อต้านส่วนประกอบ ) .

ซีรั่มทดสอบและควบคุมจะถูกปิดใช้งานในวันที่เกิดปฏิกิริยาในรูปแบบเจือจางที่ 56-65°C (ขึ้นอยู่กับประเภทของสัตว์) เป็นเวลา 30 นาที (รวมถึงใน RDSC ด้วย)

ปฏิกิริยาทั้งสองขั้นตอนดำเนินการในอ่างน้ำที่อุณหภูมิ 37-38°C ระบบสลายแบคทีเรียจะถูกเก็บไว้เป็นเวลา 60 นาที ขั้นตอนที่สองของปฏิกิริยา (ด้วยระบบเม็ดเลือดแดงแตก) จะถูกเก็บไว้เป็นเวลา 20 นาที

การควบคุมประสบการณ์หลักของ RSK:

ซีรั่มเชิงบวกเจือจาง 1:5 โดยไม่มีแอนติเจนและมีแอนติเจนควบคุม ในการเจือจางตั้งแต่ 1: 5 ถึงระดับไทเทอร์ด้วยแอนติเจนจำเพาะ

ซีรั่มเชิงลบในการเจือจาง 1: 5 และ 1: 10 ด้วยแอนติเจนเฉพาะในการเจือจาง 1: 5 ด้วยแอนติเจนควบคุมและไม่มีแอนติเจน - แอนติเจนที่จำเพาะและควบคุมในขนาดสองเท่า - สำหรับการต่อต้านการเสริม (ส่วนประกอบ +) และสำหรับ ความเป็นพิษต่อเม็ดเลือด (ส่วนประกอบ);

ระบบ hemolytic สำหรับพิษต่อเม็ดเลือด (ส่วนประกอบ)

การบัญชีสำหรับผลลัพธ์ การควบคุมของภาวะเม็ดเลือดแดงแตกไม่ควรมีร่องรอยของเม็ดเลือดแดงแตกเนื่องจากหนึ่งในนั้นไม่มีส่วนประกอบส่วนอีกอัน - ฮีโมไลซิน การควบคุมระบุว่าส่วนประกอบของปฏิกิริยาไม่มีพิษต่อเลือด (ความสามารถในการสลายเซลล์เม็ดเลือดแดงได้เอง)

ในการทดลอง กิจกรรมของส่วนประกอบเสริมสามารถลดลงเนื่องจากการดูดซับที่ไม่จำเพาะโดยส่วนประกอบอื่น ๆ ของปฏิกิริยา ดังนั้นสำหรับการทดลอง ปริมาณของส่วนประกอบเสริมจะเพิ่มขึ้น: ใช้ขนาดยาตามไทเทอร์ นี่คือปริมาณการทำงาน

มีอยู่ ตัวเลือกต่างๆโปรดักชั่นของ RSK: classic วิธีกำหนดสูตรในรูปของตัวแปรมาโครและไมโคร ปฏิกิริยาการตรึงคอมพลิเมนต์ระยะยาว (LDSC) ในความเย็น วิธีวัดปริมาณ RSC ขึ้นอยู่กับภาวะเม็ดเลือดแดงแตก 50% ของเม็ดเลือดแดงที่ไวต่อความรู้สึก ฯลฯ ในการวินิจฉัยโรคจำนวนหนึ่งจะใช้วิธีการที่มีความละเอียดอ่อนมากขึ้น - RDS

การจัดตั้งปฏิกิริยาการตรึงส่วนเสริมระยะยาว (LDSC)

ระยะแรกของปฏิกิริยาดำเนินการในตู้เย็นที่อุณหภูมิ 2-6°C เป็นเวลา 16-18 ชั่วโมง ระยะที่สองในอ่างน้ำเป็นเวลา 20 นาทีที่ 37-38°C

ส่วนเสริมจะใช้ในการเจือจางการทำงานที่ 1:25 หรือ 1:30 (เมื่อพิจารณาการเจือจางการทำงาน)

ในวันแรก ซีรั่มและแอนติเจนจะถูกบรรจุขวดสำหรับการทดลองหลัก ปฏิกิริยาจะดำเนินการในปริมาตร 1 ลูกบาศก์เมตร ซม. (0.2 ซีซี ของแต่ละส่วนประกอบ) การควบคุม RDSC จะเหมือนกับเมื่อตั้งค่า RSK

จากนั้นเทส่วนประกอบเสริม 0.2 ซีซีลงในหลอดทดลองทั้งหมดของการทดลองหลักและส่วนควบคุมที่เกี่ยวข้อง ซม. ขึ้นอยู่กับการเจือจางในการทำงาน หลอดจะเขย่าและวางในตู้เย็นเป็นเวลา 16-18 ชั่วโมง ที่อุณหภูมิ 2-6°C

ในวันถัดไปชั้นวางที่มีเฟสแรกจะถูกนำออกจากตู้เย็นและหลังจากยืนประมาณ 20-30 นาที ที่อุณหภูมิห้องระบบ hemolytic จะถูกเทลงในหลอดทดลองทั้งหมดในขนาด (ในตัวอย่างที่ให้ไว้ - 0.6 ลูกบาศก์ซม.) เขย่าชั้นวางและวางไว้ในอ่างน้ำเป็นเวลา 20 นาที ที่อุณหภูมิ 37-38°C

โครงร่างของการทดลองหลักของ RDSC แสดงไว้ในตารางที่ 3

ผลลัพธ์ของ RSC และ RDSK จะถูกนำมาพิจารณาสองครั้ง: ครั้งแรก - ทันทีหลังอ่างน้ำ, ครั้งที่สอง - หลังจากที่เซลล์เม็ดเลือดแดงตกลงไปที่ด้านล่างของหลอดทดลอง (3-4 ชั่วโมงหลังอ่างน้ำ) หรือ วันถัดไปเมื่อเก็บไว้ในตู้เย็นอุณหภูมิ 2° ถึง 6°C

เพื่อกำหนดผลลัพธ์ของปฏิกิริยาอย่างเป็นกลาง แนะนำให้ประเมินเปอร์เซ็นต์ของภาวะเม็ดเลือดแดงแตก ในการทำเช่นนี้ จะทำการเลือกหลอดทดลอง 5 หลอดที่มีภาวะเม็ดเลือดแดงแตกสมบูรณ์ (100%) จากปฏิกิริยาและของเหลวจากหลอดเหล่านั้นจะถูกเทลงในหลอดทดลองเดียว จากนั้นจะเตรียมการเจือจางที่มีเปอร์เซ็นต์ของภาวะเม็ดเลือดแดงแตกต่ำกว่าซึ่งเรียกว่ามาตราส่วน "มาตรฐาน"

ระดับของภาวะเม็ดเลือดแดงแตกในหลอดทดลองที่มีซีรั่มทดสอบถูกกำหนดโดยการเปรียบเทียบกับระดับของภาวะเม็ดเลือดแดงแตกในหลอดทดลอง "มาตรฐาน" และเปอร์เซ็นต์ของภาวะเม็ดเลือดแดงแตกจะแสดงเป็นรูปกากบาท

ระดับของความล่าช้าจะแปรผกผันกับเปอร์เซ็นต์ของภาวะเม็ดเลือดแดงแตก:

++++ (4 ไม้กางเขน) - ไม่มีภาวะเม็ดเลือดแดงแตก, ของเหลวเหนือตะกอนมีความโปร่งใส, ไม่มีสี;

+++ (3 ไม้กางเขน) - ภาวะเม็ดเลือดแดงแตก 25% ของเซลล์เม็ดเลือดแดง;

++ (2 กากบาท) - ภาวะเม็ดเลือดแดงแตก 50% ของเม็ดเลือดแดง;

+ (1 cross) - ภาวะเม็ดเลือดแดงแตก 75% ของเม็ดเลือดแดง;

(ลบ) - ภาวะเม็ดเลือดแดงแตกโดยสมบูรณ์ของเม็ดเลือดแดง, ไม่มีตะกอน, ของเหลวมีสีเข้มข้นด้วยฮีโมโกลบิน

การประเมินผลลัพธ์ของ RSK, RDSC

ซีรั่มทดสอบได้รับการประเมินในการเจือจาง 1:5 และ 1:10 (0.04 ซีซี, 0.02 ซีซี) โดยมีภาวะเม็ดเลือดแดงแตกโดยสมบูรณ์ของเม็ดเลือดแดงในซีรั่มควบคุมที่ไม่มีแอนติเจนและมีแอนติเจนควบคุม

ปฏิกิริยาเชิงบวกจะได้รับการประเมินเมื่อภาวะเม็ดเลือดแดงแตกของเม็ดเลือดแดงล่าช้า 3-4 กากบาทที่การเจือจาง 1:10

น่าสงสัย - เมื่อเม็ดเลือดแดงแตกของเม็ดเลือดแดงล่าช้า 1 ข้ามในการเจือจางซีรั่ม 1: 10 และจาก 2 ถึง 4 ข้ามในการเจือจาง 1: 5

เชิงลบ - โดยมีภาวะเม็ดเลือดแดงแตกโดยสมบูรณ์ของเม็ดเลือดแดงในการเจือจางซีรั่ม 1: 5 และ 1: 10

ปฏิกิริยานี้ได้รับการพัฒนาโดย J. Bordet และ O. Zhangou ในปี 1901 พวกเขายอมรับว่าเมื่อมีการสร้างสารเชิงซ้อนของแอนติเจนและแอนติบอดี มันจะจับส่วนเติมเต็ม

สารประกอบที่ได้จะกระจายตัวอย่างประณีตและไม่สามารถตรวจจับได้ด้วยตาเปล่า ในการตรวจจับการดูดซับ (การจับ) ของส่วนประกอบ ผู้เขียนได้ใช้ระบบบ่งชี้ภาวะเม็ดเลือดแดงแตก ได้แก่ เม็ดเลือดแดงแกะและซีรั่มเม็ดเลือดแดงแตก ถ้าในระบบทดสอบ แอนติเจนไม่ตรงกับแอนติบอดี ภูมิคุ้มกันที่ซับซ้อนจะไม่เกิดขึ้นและส่วนประกอบจะยังคงเป็นอิสระ ส่วนประกอบจะถูกดูดซับบนสารเชิงซ้อนแอนติเจน-แอนติบอดีเท่านั้น และไม่ถูกดูดซับแยกกันบนแอนติเจนหรือแอนติบอดี ดังนั้นเมื่อเพิ่มระบบการทดสอบเม็ดเลือดแดงที่ประกอบด้วยแอนติเจน - แอนติบอดีคอมเพล็กซ์สำเร็จรูป (เซลล์เม็ดเลือดแดงแกะและแอนติบอดีต่อพวกมัน) เข้ากับระบบทดสอบส่วนประกอบเสริมจะเกาะติดกับคอมเพล็กซ์นี้ทำให้เกิดภาวะเม็ดเลือดแดงแตกของเซลล์เม็ดเลือดแดงแกะ - ผลลัพธ์ที่มองเห็นได้ .

ปฏิกิริยาการตรึงส่วนเสริม (CFR) มีความไวและเฉพาะเจาะจงสูง RSC ใช้ในการวินิจฉัยโรคหนองใน ซิฟิลิส โรคไอกรน โรคริคเก็ตต์ซิโอสทุกชนิด และโรคไวรัสหลายชนิด เช่นเดียวกับปฏิกิริยาทางเซรุ่มวิทยาอื่นๆ RSC ยังสามารถใช้สำหรับการสร้างซีโรไทป์ได้

RSC เป็นปฏิกิริยาทางซีรัมวิทยาที่ซับซ้อน มันเกี่ยวข้องกับระบบแอนติเจนสองระบบ - แอนติบอดีและส่วนประกอบเสริม

ในการตั้งค่า RSC คุณต้องมี:

ความซับซ้อนของปฏิกิริยาถูกกำหนดโดยจำนวนของส่วนผสมที่เกี่ยวข้อง และโดยหลักแล้ว จำเป็นต้องกำหนดอัตราส่วนเชิงปริมาณที่แน่นอน ดังนั้นการทดลองหลักจึงต้องมีการไตเตรทส่วนผสมก่อน

เซรั่มเม็ดเลือดแดงแตกเตรียมมาใน เงื่อนไขการผลิตโดยการฉีดวัคซีนทางหลอดเลือดดำ 3-4 เท่าของกระต่ายโดยมีการระงับเม็ดเลือดแดงแกะ 50% และหยุดการทำงานที่ 56 ° C เป็นเวลา 30 นาที ในการไตเตรท ให้ลดขนาดยาลงอย่างต่อเนื่อง (1:1200, 1:1500, 1:1800, 1:2000, 1:2500) เม็ดเลือดแดงแขวนลอย 3% เสริม 1:10 ในปริมาตรที่เท่ากัน (แต่ 0.5 มล. ). ฉลากของหลอดบรรจุที่มีซีรัม hemolytic ระบุถึงระดับไทเทอร์ - การเจือจางสูงสุดที่รับประกันการสลายที่สมบูรณ์ของสารแขวนลอยของเม็ดเลือดแดงแกะ 3% ต่อหน้าส่วนประกอบเสริมเป็นเวลาหนึ่งชั่วโมงที่ 37°C สำหรับ RSC จะใช้การเจือจางในซีรั่มเพิ่มขึ้น 3 เท่าเทียบกับไทเทอร์

เม็ดเลือดแดงแกะที่แขวนลอย 3% ได้มาจากเลือดแกะที่ผ่านการกระตุ้นหัวใจโดยการล้างด้วยสารละลาย NaCl แบบไอโซโทนิก

ส่วนประกอบ - เซรั่มเลือดหนูตะเภาสดหรือแห้ง - ได้รับการไตเตรทก่อนการทดลอง: ลดขนาดยาอย่างต่อเนื่อง (1:10, 1:15, 1:20, 1:25, 1:30, 1:35, 1:40) + ภาวะเม็ดเลือดแดงแตก ระบบ ( เม็ดเลือดแดงแกะและซีรั่มเม็ดเลือดแดงแตก). หลังจากการฟักตัวในเทอร์โมสตัทที่อุณหภูมิ 37°C จะมีการกำหนดไทเทอร์เสริม ซึ่งเป็นการเจือจางสูงสุดที่ทำให้เกิดการสลายของเซลล์เม็ดเลือดแดงโดยสมบูรณ์เมื่อมีเซรั่มเม็ดเลือดแดงแตก ปริมาณการทำงานของส่วนประกอบเสริมควรสูงกว่าระดับไตเตอร์ 25% เนื่องจาก กิจกรรมของส่วนประกอบเสริมในการทดลองอาจถูกระงับโดยส่วนประกอบปฏิกิริยาอื่น ๆ (แอนติเจน, ซีรั่ม)

แอนติเจน - สารแขวนลอยของจุลินทรีย์ที่ถูกฆ่า, ไลซีน, แอนติเจนที่สมบูรณ์, แฮปเทน, สารสกัดจากไขมันในเนื้อเยื่อ - บางครั้งจะจับส่วนประกอบเสริมแม้ในกรณีที่ไม่มีเซรั่มภูมิคุ้มกัน ดังนั้นจึงจำเป็นต้องไตเตรทด้วย ลดปริมาณแอนติเจน + ปริมาณการทำงานของส่วนประกอบเสริม + ระบบเม็ดเลือดแดงแตกอย่างต่อเนื่อง ระดับของแอนติเจนคือขนาดที่เล็กที่สุดที่เกิดภาวะเม็ดเลือดแดงแตกชัดเจน สำหรับ RSC จะมีการรับประทานแอนติเจนในปริมาณหนึ่งโดยลดลงครึ่งหนึ่งเมื่อเทียบกับไทเทอร์เพื่อหลีกเลี่ยงการตรึงส่วนเสริม

ก่อนการทดลอง เซรั่มทดสอบจะถูกปิดใช้งานที่อุณหภูมิ 56°C เป็นเวลา 30 นาที เพื่อปิดการใช้งานส่วนเสริมของตัวเอง

ส่วนประกอบทั้งหมดของปฏิกิริยาการตรึงส่วนเติมเต็มจะถูกใช้ในปริมาณที่เท่ากัน

การตั้งค่าการทดสอบหลัก

หลังจากกำหนดไทเทอร์และปริมาณการทำงานของส่วนผสมทั้งหมดแล้ว จะทำการทดลองหลักของ RSC ซีรั่มที่ไตเตรทยังมีส่วนร่วมในปฏิกิริยานี้: ซีรั่มที่รู้กันว่ามีสุขภาพดีและซีรั่มที่รู้ว่าป่วย (ซีรั่มเชิงลบและบวก ตามลำดับ) เช่นเดียวกับเซรั่มทดสอบ เซรั่มควบคุมจะถูกปิดใช้งานที่อุณหภูมิ 56°C เป็นเวลา 30 นาทีเช่นกัน

RSC ดำเนินการในสองขั้นตอน:

ระยะที่ 1 - เฉพาะเจาะจง - การฟักตัวของผสมของแอนติเจน แอนติบอดี และคอมพลีเมนต์ในเทอร์โมสตัทที่อุณหภูมิ 37°C เป็นเวลา 30 นาที

ระยะที่ 2 - ตัวบ่งชี้ - พิจารณาการมีอยู่ของส่วนประกอบอิสระในส่วนผสมโดยการเพิ่มระบบ hemolytic (ก่อนหน้านี้วางไว้ในเทอร์โมสตัทเป็นเวลา 30 นาที) และการฟักตัวในเทอร์โมสตัทที่ 37 ° C เป็นเวลา 20-30 นาที

ผลลัพธ์ของการทดลองได้รับการประเมินโดยการสังเกตว่ามีหรือไม่มีภาวะเม็ดเลือดแดงแตกในหลอดทดลองทั้งหมด (ดูตาราง) ปฏิกิริยาจะถือว่าเป็นบวกเมื่อการสลายของเม็ดเลือดแดงล่าช้าโดยสิ้นเชิง เมื่อของเหลวในหลอดทดลองไม่มีสีและเซลล์เม็ดเลือดแดงตกลงไปที่ด้านล่าง ผลเป็นลบเมื่อของเหลวมีสีเข้มข้น (“เลือดเคลือบ”) ระดับความรุนแรงของภาวะเม็ดเลือดแดงแตกขึ้นอยู่กับความเข้มของสีของของเหลวและขนาดของตะกอนเซลล์เม็ดเลือดแดงที่ด้านล่าง (+ + + +, + + +, + +, +)

การบัญชีสำหรับผลลัพธ์ของ RSK

ผลลัพธ์ของการทดลอง (เซรั่มทดสอบ) สามารถนำมาพิจารณาได้หากดำเนินการควบคุมทั้งหมดอย่างถูกต้องเท่านั้น

ในหลอดที่ 2 ที่มีซีรั่มบวก (มีแอนติบอดีต่อแอนติเจนนี้) ไม่ควรมีภาวะเม็ดเลือดแดงแตกเพราะ ส่วนเติมเต็มจะถูกผูกไว้ในระบบเฉพาะแรก และระบบ hemolytic จะเหลืออยู่โดยไม่มีส่วนเสริม - เซลล์เม็ดเลือดแดงจะตกลงไปที่ด้านล่าง ส่วนของเหลวเหนือตะกอนจะโปร่งใส

ในหลอดเบอร์3ที่มีเนกาทีฟเซรั่มเซรั่ม คนที่มีสุขภาพดีซึ่งไม่มีแอนติบอดีต่อแอนติเจนที่กำหนดควรเกิดภาวะเม็ดเลือดแดงแตกเนื่องจากในระยะแรกของปฏิกิริยาการก่อตัวของคอมเพล็กซ์แอนติเจน - แอนติบอดีไม่ได้เกิดขึ้น (เนื่องจากไม่มีแอนติบอดีต่อแอนติเจนที่กำหนด) และส่วนประกอบยังคงเป็นอิสระ . เมื่อระบบโลหิตถูกเพิ่มในระยะที่ 2 ของปฏิกิริยา ส่วนประกอบจะถูกดูดซับเข้าสู่ภูมิคุ้มกันที่ซับซ้อนของเซลล์เม็ดเลือดแดงแกะพร้อมแอนติบอดีต่อพวกมัน เกิดการแตกตัวของเม็ดเลือดแดงแกะ (hemolysis)

การมีอยู่ของภาวะเม็ดเลือดแดงแตกในซีรัมและแอนติเจนควบคุม (หลอดหมายเลข 4 และ 5) บ่งชี้ว่าขนาดยาของพวกเขาถูกเลือกอย่างถูกต้อง และทั้งซีรั่มและแอนติเจนเองก็ไม่ได้ผูกมัดเสริมกัน ส่วนเสริมที่ยังคงเป็นอิสระในระบบเฉพาะนั้นจะถูกดูดซับโดยระบบภูมิคุ้มกันของระบบเม็ดเลือดแดงแตกและภาวะเม็ดเลือดแดงแตกจะเกิดขึ้น

ภาวะเม็ดเลือดแดงแตกในการควบคุมส่วนประกอบ (หลอดหมายเลข 6) บ่งชี้ถึงกิจกรรมของส่วนประกอบเสริมและการเลือกขนาดยาที่ถูกต้อง

ในการควบคุมระบบเม็ดเลือดแดงแตก (หลอดทดลองหมายเลข 7) หากระบบนี้ทำงานถูกต้องก็ไม่ควรมีร่องรอยของเม็ดเลือดแดงแตกด้วยซ้ำเพราะว่า มันขาดส่วนเสริม

หากผลการควบคุมสมบูรณ์แบบ สามารถพิจารณาประสบการณ์ได้ (หลอดทดลองหมายเลข 1) การไม่มีภาวะเม็ดเลือดแดงแตกถือเป็นผลบวก บ่งชี้ว่าตรวจพบแอนติบอดีต่อแอนติเจนที่ระบุในซีรั่มทดสอบ (ผู้ป่วย) เมื่อแอนติเจนจับคู่กับแอนติบอดี จะเกิดสารเชิงซ้อนของแอนติเจน-แอนติบอดีขึ้น ซึ่งจับส่วนเติมเต็ม (ระยะที่ 1) เมื่อเพิ่มระบบเม็ดเลือดแดงแตก ระยะที่ 2 จะไม่มีภาวะเม็ดเลือดแดงแตก การปรากฏตัวของภาวะเม็ดเลือดแดงแตกเป็นผลลบซึ่งบ่งชี้ว่าไม่มีแอนติบอดีต่อแอนติเจนนี้ (บุคคลนั้นมีสุขภาพดี) ส่วนประกอบจะยังคงเป็นอิสระ และเมื่อมีการเพิ่มระบบเม็ดเลือดแดงแตกเข้าไป จะเข้าไปรวมตัวกับสารเชิงซ้อนของเม็ดเลือดแดง-ฮีโมไลซิน ทำให้เกิดภาวะเม็ดเลือดแดงแตก

หน้าที่ 33 จาก 91

ปฏิกิริยาการตรึงส่วนเติมเต็ม (CFR)
การรวมกันของแอนติบอดีกับแอนติเจนและส่วนประกอบไม่จำเป็นต้องมาพร้อมกับการทำลายแอนติเจน นี้. ในระดับที่มากขึ้นนำไปใช้กับจุลินทรีย์ที่แสดงความต้านทานต่อการกระทำ lytic ของส่วนประกอบเสริม การเชื่อมโยงของส่วนประกอบที่เกิดขึ้นในกรณีดังกล่าวสามารถตรวจพบได้ทางอ้อมโดยใช้วิธีที่ค้นพบโดย J. Bordet และ S. Zhang สาระสำคัญของวิธีการมีดังนี้ เมื่อซีรั่มภูมิคุ้มกันทำปฏิกิริยากับแอนติเจนจำเพาะ แอนติเจนจะรวมตัวกับแอนติบอดี ทำให้เกิดแอนติบอดี-แอนติเจนที่ซับซ้อนซึ่งจะจับส่วนเติมเต็ม ในกรณีที่ไม่ตรงกันระหว่างแอนติเจนและแอนติบอดี การจับส่วนเติมเต็มจะไม่เกิดขึ้น กล่าวคือ ส่วนเติมเต็มยังคงเป็นอิสระ กระบวนการจับส่วนประกอบระหว่างปฏิกิริยาเชิงบวกของแอนติบอดีกับแอนติเจนยังคงมองไม่เห็น ดังนั้นเพื่อตรวจสอบว่าส่วนประกอบนั้นเกาะติดกันหรือยังคงเป็นอิสระอยู่ จึงมีการใช้ระบบเม็ดเลือดแดงแตก (ซีรั่มเม็ดเลือดแดงแตก - เม็ดเลือดแดงแตกและเซลล์เม็ดเลือดแดงแกะ) เข้าสู่ปฏิกิริยาเพื่อเป็นตัวบ่งชี้ ปฏิกิริยาการตรึงส่วนเสริมจะดำเนินการในสองขั้นตอน: ในระยะแรกแอนติเจนและส่วนประกอบเสริมจะถูกเพิ่มลงในซีรั่มทดสอบ (แอนติบอดี) ในระยะที่สองจะมีการเพิ่มระบบเม็ดเลือดแดงแตก
หากในระยะแรกของปฏิกิริยาซีรั่มทดสอบมีแอนติบอดีจำเพาะต่อแอนติเจนส่วนประกอบนั้นจะสัมพันธ์กับแอนติเจน + แอนติบอดีคอมเพล็กซ์ ด้วยการเติมระบบ hemolytic ภาวะเม็ดเลือดแดงแตกจะไม่เกิดขึ้นและปฏิกิริยาจะถือว่าเป็นบวก .
หากซีรัมทดสอบไม่มีแอนติบอดีจำเพาะ เช่น แอนติเจนและแอนติบอดีไม่สอดคล้องกัน สารเสริมในระยะแรกของปฏิกิริยาจะยังคงเป็นอิสระ และเมื่อเพิ่มระบบเม็ดเลือดแดงแตก ภาวะเม็ดเลือดแดงแตก (การละลาย) ของเลือดแดง เซลล์จะเกิดขึ้น กล่าวคือ ปฏิกิริยาจะเป็นลบ (ดูรูปที่ 57)
ปฏิกิริยา Bordet-Gengou (ปฏิกิริยาการตรึงเสริม) ซึ่งมีความไวสูง ได้รับความสำคัญในการวินิจฉัยอย่างมาก ความสำคัญนี้เพิ่มมากขึ้นอีกเมื่อ Zhangu แสดงให้เห็นว่าปฏิกิริยานี้อาจเกิดขึ้นได้ไม่เฉพาะกับตัวแบคทีเรียเท่านั้น แต่ยังรวมถึงสารสกัดด้วย ปฏิกิริยา Bordet-Gengou ใช้ในการวินิจฉัยโรคต่อมหมวกไต โรคหนองใน และโรคอื่นๆ A. Wasserman ตามแนวคิดของ J. Bordet ใช้ปฏิกิริยาการตรึงเสริมสำหรับการวินิจฉัยโรคซิฟิลิส ปฏิกิริยานี้ได้รับ การใช้งานจริงในการรู้จักโรคซิฟิลิส
ปฏิกิริยาการตรึงส่วนเสริมมีจุดประสงค์สองประการ:

1. เพื่อตรวจหาแอนติบอดีจำเพาะในซีรั่มโดยใช้แอนติเจนที่รู้จัก ตัวอย่างเช่น เมื่อมีแอนติเจนที่เตรียมจากการเพาะเชื้อ gonococcal ก็เป็นไปได้ที่จะตรวจพบแอนติบอดีต่อ gonococcal ในซีรั่มของผู้ป่วย ในกรณีนี้ จำเป็นต้องใช้แอนติเจน ซึ่งเป็นขนาดยาเสริมการตรึงที่ได้รับการไตเตรทล่วงหน้ากับซีรั่มของผู้ป่วยจำนวนมาก
2. เพื่อตรวจสอบชนิดของแอนติเจนโดยใช้ซีรั่มที่มีแอนติบอดีต่อแอนติเจนจำเพาะ ตัวอย่างเช่น การใช้เซรั่มภูมิคุ้มกันที่เหมาะสม จะสามารถระบุบาซิลลัสไอกรนได้ ในกรณีเหล่านี้ จำเป็นต้องมีเซรั่มภูมิคุ้มกันที่แข็งแรง ซึ่งทราบระดับของระดับไตเตอร์แล้ว

ส่วนประกอบ (ส่วนประกอบ) ของปฏิกิริยา สำหรับปฏิกิริยาการตรึงส่วนเติมเต็ม จำเป็นต้องมีส่วนผสมต่อไปนี้: 1) เม็ดเลือดแดงแกะ 2) เซรั่มเม็ดเลือดแดงแตก 3) ส่วนประกอบเสริม 4) แอนติเจน และ 5) เซรั่มทดสอบ
1. เม็ดเลือดแดงได้มาจากเลือดแกะที่ถูกช็อกหัวใจ ในการทำเช่นนี้เลือดจะถูกพรากจากแกะจากเส้นเลือดคอโดยตรงลงในขวดที่มีลูกปัดแก้ว เขย่าเป็นเวลา 10 นาที กรองผ่านผ้ากอซฆ่าเชื้อ ปั่นแยก และดูดซีรั่มออก ล้างเซลล์เม็ดเลือดแดงออกจากซีรั่มที่เหลือสามครั้งด้วยสารละลายโซเดียมคลอไรด์ทางสรีรวิทยาโดยการหมุนเหวี่ยงเป็นเวลา 10-15 นาที หลังจากการปั่นแยกครั้งที่สาม จะมีการเตรียมสารแขวนลอยของเม็ดเลือดแดง 3% จากตะกอนสำหรับการทดลอง เมื่อเก็บไว้ในธารน้ำแข็ง เลือดที่ช็อกแล้วสามารถบริโภคได้ภายใน 6-8 วัน

โครงการเตรียมการเจือจางเซรั่ม hemolytic จากการเจือจางหลัก 1: 100

1. เซรั่มเม็ดเลือดแดงแตกมักจะได้มาจากกระต่ายที่ได้รับภูมิคุ้มกันจากเซลล์เม็ดเลือดแดงแกะ เซรั่มเม็ดเลือดแดงแตกผลิตในรูปแบบแห้งโดยสถาบันเตรียมแบคทีเรีย ฉลากหลอดบรรจุระบุระดับไตเตอร์ของซีรั่มและวันหมดอายุ

ตารางที่ 4
แผนการไตเตรทในซีรั่มเม็ดเลือดแดงแตก

ไตเตอร์ของซีรัม hemolytic คือการเจือจางสูงสุด ซึ่งสามารถละลายเซลล์เม็ดเลือดแดงที่แขวนลอย 3% ได้ 0.5 มล. ต่อหน้าส่วนประกอบเสริม 0.5 มล. ภายในหนึ่งชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37°
ระดับไตเตอร์ของซีรั่ม hemolytic ถูกกำหนดตามรูปแบบต่อไปนี้: เตรียมการเจือจางหลักของซีรั่ม 1: 100 (ซีรั่ม 0.1 มล. + สารละลายทางสรีรวิทยา 0.9 มล.) จากนั้นจึงเตรียมการเจือจางเพิ่มเติม (ตารางที่ 3)
การเจือจางของซีรั่มเม็ดเลือดแดงที่เกิดขึ้น 0.5 มล. จะถูกวัดตามลำดับในหลอดทดลองจำนวนหนึ่งโดยเริ่มจาก 1: 1,000, อาหารเสริม 0.5 มล., เจือจาง 1:10 และ 0.5 มล. ของสารแขวนลอย 3% ของเซลล์เม็ดเลือดแดง แต่ละหลอดทดลอง การไตเตรทของซีรั่มเม็ดเลือดแดงแตกดำเนินการตามรูปแบบ (ตารางที่ 4)
แผนภาพแสดงให้เห็นว่าซีรั่มนี้ แม้จะเจือจางที่ 1: 1500 ก็ให้ภาวะเม็ดเลือดแดงแตกโดยสมบูรณ์ (เช่น ระดับไทเทอร์ในซีรั่ม 1: 1500) ในอนาคต สำหรับการทดลอง ให้ใช้การเจือจางที่มีขนาดเล็กกว่า 3 เท่า (ไทเทอร์สามเท่า) ตัวอย่างเช่นหาก titer ของซีรั่ม hemolytic คือ 1: 1500 จะใช้การเจือจาง 1:500 (เช่น 0.1 มล. ของซีรั่ม 49.9 มล. ของน้ำเกลือ)

1. เสริม. ส่วนประกอบในการทำปฏิกิริยาคือเซรั่มหนูตะเภา (ส่วนประกอบของพวกมันมีฤทธิ์มากที่สุด) หรือส่วนประกอบแบบแห้งที่ผลิตโดยสถาบันเตรียมแบคทีเรีย

เนื่องจากระดับของกิจกรรมเสริมไม่เหมือนกันในหนูตะเภาทุกตัว จึงจำเป็นต้องนำเลือดจากสัตว์หลายตัวมาผสมซีรั่มที่เกิดขึ้น
ตัวไตเตรทเสริมคือปริมาณขั้นต่ำตัวแรกของส่วนประกอบเสริมที่จะละลายเซลล์เม็ดเลือดแดง ตัวอย่างเช่น หากในรูปแบบการไตเตรทข้างต้น เกิดภาวะเม็ดเลือดแดงแตกโดยสมบูรณ์ในหลอดทดลองที่มีส่วนประกอบเสริม 0.3 มล. และภาวะเม็ดเลือดแดงแตกไม่สมบูรณ์เกิดขึ้นในหลอดทดลองที่มีส่วนประกอบเสริม 0.25 มล. ดังนั้นไตเตอร์เสริมควรพิจารณา 0.3 มล. ในการเจือจาง เท่ากับ 1: 10 ในฐานะที่เป็นขนาดยาที่ใช้งานอยู่ โดยปกติแล้วจะมีการไตเตรทของมันเพิ่มขึ้น 20-25% นั่นคือ ประมาณนี้สอดคล้องกับปริมาณของส่วนประกอบที่มีอยู่ในหลอดทดลองสุดท้ายที่มีภาวะเม็ดเลือดแดงแตก
ทั้งเมื่อไตเตรตซีรั่มเม็ดเลือดแดงแตกและเมื่อไตเตรตส่วนเสริม จะมีการวางตัวควบคุมสองตัว (ดูตารางที่ 5)

รูปแบบการไทเทรตเสริมที่ไม่มีแอนติเจน


ตารางที่ 6
รูปแบบการไตเตรทเสริมเมื่อมีแอนติเจนอยู่

นอกจากนี้ขอแนะนำให้ไตเตรทเสริมเมื่อมีแอนติเจนด้วย
การไตเตรทเสริมเมื่อมีแอนติเจนเป็นสิ่งจำเป็นในกรณีที่แอนติเจนไปยับยั้งไทเทอร์เสริม (คุณสมบัติต้านการเสริมของแอนติเจน) คุณสมบัตินี้อาจขึ้นอยู่กับทั้งลักษณะของแอนติเจนเองและวิธีการเตรียม

1. แอนติเจน ปฏิกิริยาการตรึงส่วนเติมเต็มใช้แอนติเจนหลายชนิด แอนติเจนคือการเพาะเลี้ยงจุลินทรีย์ต่างๆ หรือสารสกัดจากเนื้อเยื่อที่มีการเปลี่ยนแปลงทางพยาธิวิทยาหรือปกติ ทั้งสารแขวนลอยของจุลินทรีย์ในสารละลายทางสรีรวิทยาและสารสกัดจากจุลินทรีย์ที่เตรียมในรูปแบบต่างๆ (เช่น แอนติเจน gonococcal แอนติเจน แอนติเจนวัณโรคแอลกอฮอล์ ฯลฯ ) สามารถใช้เป็นแอนติเจนของแบคทีเรียได้ สารแขวนลอยของจุลินทรีย์ที่เคยถูกฆ่าด้วยไอฟอร์มาลดีไฮด์หรือบำบัดด้วยแอลกอฮอล์มีคุณสมบัติเป็นแอนติเจนที่ดี สำหรับปฏิกิริยา สารแขวนลอยแอนติเจนดั้งเดิมจะถูกเจือจางตามมาตรฐานเชิงแสงที่ประกอบด้วย จุลินทรีย์ 1 พันล้านตัวใน 1 มล. และรับประทานในปริมาณ 0.5 มล.

จุลินทรีย์ไลซีนในน้ำกลั่นหรือน้ำเกลือที่ได้จากเครื่อง Schüttel (เครื่องเขย่า) หรือโดยการบำบัดด้วยแอนติฟอร์มิน ก็ใช้เป็นแอนติเจนเช่นกัน
สำหรับปฏิกิริยา ควรใช้แอนติเจนในปริมาณหนึ่งที่ทำให้เกิดความล่าช้าโดยสิ้นเชิงในการแตกของเม็ดเลือดแดงด้วยซีรั่มที่มีเฮโมไลซินที่สอดคล้องกัน แต่ในตัวมันเองไม่ได้ทำให้ภาวะเม็ดเลือดแดงแตกช้าลง เนื่องจากแอนติเจนของจุลินทรีย์ทั้งหมดดูดซับส่วนประกอบเสริมจำนวนหนึ่ง ก่อนการไทเทรต จึงทดสอบคุณสมบัติต่อต้านส่วนประกอบเสริมโดยการกำหนดปริมาณการละลายของส่วนประกอบเสริม กล่าวคือ จำนวนมากที่สุดแอนติเจนซึ่งไม่ทำให้เกิดความล่าช้าในภาวะเม็ดเลือดแดงแตก การกำหนดปริมาณแอนติเจนที่ละลายได้นั้นดำเนินการตามโครงการ (ตารางที่ 7)
ตารางแสดงให้เห็นว่าในตัวอย่างนี้ ปริมาณการละลายของแอนติเจนคือ 0.4 มิลลิลิตร สำหรับการทดลอง ให้รับประทานครึ่งหนึ่งของขนาดยานี้ เช่น ขนาดยาโดยประมาณจะเท่ากับ 0.2 มล.

1. ทดสอบเซรั่ม ซีรัมของผู้ป่วยจะถูกแยกออกจากก้อนเลือด 3-48 ชั่วโมงหลังการเก็บเลือด และปิดใช้งานในอ่างน้ำที่อุณหภูมิ 56° เป็นเวลา 30 นาที

ตารางที่ 7 โครงการกำหนดปริมาณการละลายของแอนติเจน

เซรั่มที่ไม่ใช้งานสามารถเก็บไว้ในตู้เย็นได้ 5-6 วัน สำหรับปฏิกิริยานี้ เซรั่มของผู้ป่วยจะใช้ในการเจือจาง 1:5 (เซรั่ม 0.1 มล. + สารละลายทางสรีรวิทยา 0.4 มล.)
การตั้งค่าการทดลองปฏิกิริยาการตรึงส่วนเติมเต็ม (ตารางที่ 8)
ในการทำปฏิกิริยาการตรึงส่วนเสริม จำเป็นต้องใช้ส่วนผสมต่อไปนี้:

1. น้ำเกลือ (0.85%);
2. เซรั่มที่จะทดสอบ ปิดการทำงานที่ 56° เป็นเวลา 30 นาทีในอ่างน้ำ
3. แอนติเจน (สารแขวนลอยของแบคทีเรียหรือสารสกัดจากพวกมัน) ที่ไม่ทำให้เกิดภาวะเม็ดเลือดแดงแตกอย่างอิสระหรือชะลอในปริมาณที่กำหนดโดยการไตเตรท
4. เสริมในปริมาณการทำงานที่กำหนดโดยการไตเตรท;
5. เซรั่มเม็ดเลือดแดงแตกในขนาดที่สอดคล้องกับไทเทอร์สามของมัน;
6. สารแขวนลอย 3% ของเม็ดเลือดแดงแกะ

ส่วนผสมแต่ละอย่างที่ใช้ทำปฏิกิริยาจะใช้ในปริมาณ 0.5 มล. หากปริมาณของส่วนประกอบแต่ละชิ้นน้อยกว่าปริมาตรนี้ให้เสริมด้วยสารละลายทางสรีรวิทยาเป็น 0.5 มล.
ขอแนะนำให้ทำการทดลองหลักในการตรึงเสริมด้วยแอนติเจนที่เตรียมไว้สองหรือสามตัวในคราวเดียว ในทางที่แตกต่าง(A1, A2, A3 ในตารางที่ 8)

โครงการประสบการณ์ขั้นพื้นฐาน

ในการควบคุม จำเป็นต้องทำปฏิกิริยาไปพร้อมๆ กันภายใต้สภาวะเดียวกันกับเซรั่มและเซรั่มปกติที่ให้ผลลัพธ์ที่เป็นบวกอย่างเห็นได้ชัด เมื่อตั้งค่าปฏิกิริยา เซรั่มทดสอบ แอนติเจน และส่วนประกอบจะถูกผสมกันก่อน ส่วนผสมจะถูกเก็บไว้ที่ 37° เป็นเวลาหนึ่งชั่วโมง หลังจากระยะเวลาที่กำหนดจะมีการเติมส่วนผสมของซีรัมเม็ดเลือดแดงแตกและเม็ดเลือดแดงลงในหลอดทดลอง - ระบบเม็ดเลือดแดงแตก ระบบเม็ดเลือดแดงแตกจะถูกเพิ่มทันทีหลังจากเตรียมส่วนผสมของซีรัมเม็ดเลือดแดงแตกและเซลล์เม็ดเลือดแดงในปริมาณเท่ากัน หรือหลังจากเก็บส่วนผสมนี้ไว้ในเทอร์โมสตัทเป็นเวลาครึ่งชั่วโมง หลังจากการเขย่าอย่างแรง ส่วนผสมของส่วนผสมทั้งหมดจะถูกวางในเทอร์โมสตัทที่อุณหภูมิ 37° เป็นเวลา 1 ชั่วโมง จากนั้นจึงนำไปแช่ในตู้เย็นหรือทิ้งไว้ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 12 ชั่วโมง
ในหลอดทดลองที่เกิดภาวะเม็ดเลือดแดงแตกเกิดขึ้น ของเหลวจะใสแต่มีสี (ดูรูปที่ 58)

ข้าว. 58. โครงการปฏิกิริยาการตรึงส่วนเสริม
ก - ปฏิกิริยาเป็นบวก ข - ปฏิกิริยาเชิงลบ

ผลลัพธ์ของปฏิกิริยาจะแสดงด้วยคำว่าปฏิกิริยา "บวก" "เชิงลบ" หรือด้วยเครื่องหมายบวก (+) หรือลบ (-) แต่เนื่องจากระดับของความล่าช้าของเม็ดเลือดแดงแตกอาจมีตั้งแต่ความล่าช้าโดยสิ้นเชิงไปจนถึงอ่อนมาก การกำหนดอาจเป็นดังนี้:
(++ + +) - ความล่าช้าของภาวะเม็ดเลือดแดงแตกโดยสมบูรณ์; ของเหลวไม่มีสีมีตะกอนเซลล์เม็ดเลือดแดงที่สำคัญ
(+ + +) - ความล่าช้าที่ชัดเจนของภาวะเม็ดเลือดแดงแตก; ของเหลวสี, ตะกอนเม็ดเลือดแดง;
(++) - ความล่าช้าบางส่วนของภาวะเม็ดเลือดแดงแตก; ของเหลวมีสีเข้มข้น ตะกอนขนาดกะทัดรัดของเม็ดเลือดแดง
(+) - ความล่าช้าเล็กน้อยมากในภาวะเม็ดเลือดแดงแตก; ของเหลวมีสีเข้มข้นตะกอนมีขนาดเล็ก
(±) - ร่องรอยของภาวะเม็ดเลือดแดงแตกล่าช้า, ตะกอนเล็กน้อยจะสังเกตเห็นได้ชัดเจนในระหว่างการเขย่า;
(-) - ภาวะเม็ดเลือดแดงแตกโดยสมบูรณ์ (ปฏิกิริยาเชิงลบ)