Determinação do grupo sanguíneo por método direto. Determinação do grupo sanguíneo usando soros padrão

O procedimento para determinação de grupos sanguíneos pelo sistema ABO consiste na identificação dos antígenos A e B nos eritrócitos por meio de anticorpos padrão e pela utilização de aglutininas no plasma ou soro do sangue analisado com eritrócitos padrão. A técnica foi desenvolvida no início do século 20 e ainda é ativamente utilizada na medicina. A determinação dos antígenos A e B é realizada graças aos ciclones anti-A e anti-B.

Conceitos Básicos

Nos doadores, são sempre determinados não apenas antígenos nos eritrócitos, mas também aglutininas no soro (plasma) usando eritrócitos padrão. O sangue venoso é usado como biomaterial. Antes do teste, você deve abandonar os alimentos gordurosos um dia antes do teste e não fumar meia hora antes de fazer o teste. Os grupos sanguíneos são determinados duas vezes: primeiro no departamento médico, onde o material é preparado, e depois confirmados por pesquisas em laboratório.

A determinação de grupos sanguíneos pelo sistema ABO é o principal exame utilizado em transfusiologia. Além disso, alguns animais têm um sistema de grupo sanguíneo semelhante, como chimpanzés, gorilas e bonobos.

História da descoberta

Existe uma opinião geralmente aceita na ciência de que o método de determinação de grupos sanguíneos usando o sistema ABO foi identificado pela primeira vez por Karl Landsteiner, um cientista austríaco, em 1900. Então ele descreveu em seu trabalho três tipos de antígenos. Por isso, trinta anos depois foi premiado premio Nobel em medicina e fisiologia. Devido ao fato de que antes não existiam ligações estreitas entre os cientistas, foi posteriormente estabelecido que o serologista tcheco Jan Jansky, independentemente da pesquisa de K. Landsteiner, foi o primeiro a descrever os quatro grupos sanguíneos humanos, mas sua pesquisa não foi conhecido por um grande público. Atualmente, é a classificação desenvolvida por J. Jansky que é utilizada na Rússia e nas repúblicas ex-URSS. Nos EUA, W. L. Moss criou seu trabalho semelhante em 1910.

Método para determinação de grupos sanguíneos de acordo com o sistema ABO usando zoliclones

O tipo sanguíneo deve ser determinado em sala com boa iluminação, mantendo a faixa de temperatura de 15 a 25 graus Celsius, pois desvios dessa norma podem afetar os resultados do estudo. As iniciais e o sobrenome do paciente estão escritos na placa ou placa. Da esquerda para a direita ou em círculo, são aplicadas designações de grupo padrão (O(I), A(II), B(III)). Os soros correspondentes são colocados gota a gota sob eles usando pipetas separadas para cada tipo. O sangue do paciente é então adicionado a eles. O material para estudo é retirado do lóbulo da orelha ou do dedo. Isso é exigido pela técnica de determinação do grupo sanguíneo usando o sistema ABO.

Também é legal usar glóbulos vermelhos que estão em um tubo de ensaio após a formação de um coágulo. É necessário que a quantidade de soro seja dez vezes maior que a quantidade de sangue adicionado. Depois disso, as gotas são misturadas com bastões de vidro (separadamente para cada um). Durante cinco minutos, agitando suavemente a placa, observe o aparecimento de reação de hemaglutinação. É revelado pelo aparecimento de pequenos caroços vermelhos, que depois se fundem em outros maiores. O soro perde quase completamente a cor neste momento.

Para eliminar a falsa hemaglutinação de simples adesão de hemácias, é necessário adicionar uma gota de soro fisiológico após três minutos e verificar se a aglutinação persiste. Se sim, então é verdade. Pronto, está concluída a determinação dos grupos sanguíneos segundo o sistema ABO.

interpretação de resultados

Como resultado, quatro reações podem ser observadas:

• não ocorre aglutinação com nenhum dos soros - primeiro grupo O(I);
• a reação apareceu com os soros I(ab) e III(a) - o segundo grupo A(II);
• a aglutinação ocorre com os soros I(ab) e II(b) - terceiro grupo B(III);
• se a reação ocorrer com três soros, é necessário realizar um procedimento adicional com reagentes do grupo AB (IV), que são padrão; se não houver aglutinação nessa gota, podemos supor que se trata do 4º grupo sanguíneo AB (IV).

Método expresso para fator Rh

O método de determinação de grupos sanguíneos pelo sistema ABO envolve a detecção simultânea do fator Rh (Rh).

A superfície da placa é pré-umedecida e nela estão escritos “soro controle” e “soro anti-rhesus”. Em seguida, uma ou duas gotas dos reagentes necessários são colocadas sob as inscrições e o material analisado é adicionado a elas. Para isso, você também pode usar sangue de um dedo (na mesma quantidade do volume de soro) ou hemácias que ficam no fundo do tubo após o aparecimento do coágulo (metade do volume de soro). A escolha do material não afeta o resultado final. Em seguida, o sangue e o soro são misturados com um bastão de vidro seco, após o que se espera a reação por cinco minutos. Para eliminar leituras falsas, uma solução isotônica de cloreto de sódio (apenas algumas gotas) é adicionada após três a quatro minutos. A determinação do grupo sanguíneo de acordo com os sistemas ABO e Rh é realizada com muita frequência.

Se ocorrer aglutinação de glóbulos vermelhos em uma gota de soro, isso indica sangue Rh positivo. Segundo as estatísticas, o Rh+ ocorre em 85% da população mundial. Sua ausência nos permite falar em afiliação Rh negativo. Se aparecer aglutinação no soro controle, significa que ele se tornou inutilizável. Infelizmente, o algoritmo para determinar o grupo sanguíneo pelo sistema ABO nem sempre funciona perfeitamente.

Que erros podem ser cometidos com esta técnica?

As imprecisões na determinação se o sangue pertence a um grupo específico dependem dos seguintes motivos:

• Técnico.
• Especificidade biológica do sangue que está sendo testado.
• Inferioridade de soros e eritrócitos padrão.

Erros técnicos

Possíveis erros ao determinar o grupo sanguíneo ABO pelo método cruzado:

Erros de especificidade biológica

Os erros associados à especificidade biológica do sangue analisado são divididos em dois tipos.

• Dependendo das características dos glóbulos vermelhos.
• Erros causados ​​pelas características biológicas do soro.

Vejamos cada tipo com mais detalhes.

Dependendo das características dos glóbulos vermelhos

• Aglutinação tardia, explicada por formas “fracas” de glóbulos vermelhos e antígenos. Para evitar erros, é necessário determinar o grupo sanguíneo de doadores e receptores por meio de hemácias padrão. O aglutinogênio A2 deve ser identificado repetindo o estudo com outros tipos de reagentes e outras vidrarias, aumentando o tempo de registro da reação.
• “Panaaglutinação” (“autoaglutinação”) é a capacidade do sangue de exibir a mesma reação de natureza inespecífica com todos os soros, inclusive o seu próprio. Após cinco minutos, a gravidade dessa aglutinação enfraquece, embora deva aumentar. Casos semelhantes são observados em pacientes com câncer, queimados, etc. Como controle, é necessário avaliar a manifestação de aglutinação das hemácias analisadas em soro padrão do quarto grupo e solução salina. Com a “panaglutinação”, o grupo sanguíneo é determinado como resultado da tripla lavagem dos glóbulos vermelhos. Se não der resultado desejado, vale a pena coletar novamente uma amostra de sangue em um tubo de ensaio aquecido antes do procedimento e colocar a amostra em um recipiente térmico para ajudar a manter a temperatura de 37 graus Celsius ou mais. Em seguida, deve ser levado ao laboratório, onde é mantida a temperatura acima e utilizado soro fisiológico aquecido, placa e reagentes.

• Às vezes, os glóbulos vermelhos do sangue analisado estão dispostos como “colunas de moedas” e podem ser confundidos com aglutinados. Se você adicionar duas gotas de uma solução isotônica e balançar suavemente a placa, os glóbulos vermelhos se moverão para a posição correta.
• Aglutinação incompleta ou mista, ocorrendo em pacientes do segundo, terceiro e quarto grupos em decorrência de transplante de medula óssea ou nos primeiros três meses após transfusão sanguínea 0(I).

Devido às características biológicas do soro

Erros associados ao uso de glóbulos vermelhos e soros padrão defeituosos

Soros fracos com prazo de validade vencido ou com título inferior a 1:32 são capazes de gerar aglutinação fraca e tardia. O uso de tais reagentes é inaceitável.

A utilização de eritrócitos ou soros padrão inutilizáveis, preparados em condições não estéreis e insuficientemente preservados, leva ao aparecimento de aglutinação “bacteriana”, de natureza inespecífica.

Existem muitas suposições populares sobre os grupos sanguíneos ABO que apareceram imediatamente após sua descoberta em diferentes culturas mundiais. Por exemplo, na década de 30 do século passado, no Japão e em alguns outros países, uma teoria que ligava o tipo sanguíneo a um ou outro tipo de personalidade ganhou popularidade. Teorias semelhantes ainda são populares hoje.

Também existe a opinião de que uma pessoa do grupo A é suscetível a uma ressaca severa, O está associado a bons dentes e grupo A2 - com o nível de QI mais alto. Mas tais afirmações não foram comprovadas cientificamente.

Examinamos a determinação de grupos sanguíneos de acordo com o sistema ABO usando soros padrão.

Indicações: a necessidade de transfusão de sangue, preparação para cirurgia.

Preparar: uma placa padrão com recortes; um conjunto de bastões de vidro; solução isotônica de cloreto de sódio; um conjunto de soros hemaglutinantes dos grupos 1,2,3,4 de duas séries; pipetas; teste de sangue retirado de uma veia ou dedo; assistir; bandejas, luvas; recipientes para resíduos; recipientes com soluções desinfetantes.

Preparação para manipulação:

1. O enfermeiro está totalmente preparado para realizar o procedimento: vestido com terno (bata), máscara, luvas, touca e calçado de reposição.
2. Verifique a qualidade dos soros hemaglutinantes padrão através de: codificação de cores, aparência(leve, transparente); a segurança da embalagem, a presença de um rótulo corretamente desenhado.
3. Prepare tudo o que for necessário para realizar a manipulação.

Realizando a manipulação:

Em placa branca, conforme designação, aplicar sequencialmente uma gota de soro dos grupos 1, 2, 3 de duas séries. Abaixe imediatamente cada pipeta na mesma ampola (frasco) de onde foram retiradas;

Usando um bastão de vidro, aplique uma gota do sangue a ser testado próximo às reentrâncias (6 reentrâncias). Uma gota de sangue deve ser 10 vezes menor que uma gota de soro;

anote o tempo e misture o sangue com soro 1 g com um bastão de vidro limpo e seco, depois com outro bastão de 2 g. etc. em todos os recessos;

conforme ocorre a aglutinação, mas não antes de 3 minutos, adicione uma gota de solução isotônica de cloreto de sódio às gotas em que ocorreu a reação de aglutinação para excluir falsa aglutinação e continue a observação por 5 minutos.

Avaliação dos resultados:

a) se a reação for positiva, eles aparecem na mistura visível aos olhos pequenos grãos que consistem em glóbulos vermelhos grudados. Os grãos pequenos se fundem em grãos grandes e, às vezes, em flocos, e o soro fica descolorido;

b) com reação negativa, o líquido permanece uniformemente colorido de rosa;

c) São possíveis 4 combinações de reações positivas e negativas:

1. se não houver aglutinação em nenhuma das células, então o sangue é do grupo I (0).

2. se houver aglutinação na primeira e na terceira células, o sangue é do grupo II (A).

3. se a aglutinação for no primeiro e segundo grupos, então o sangue é do grupo III (B).

4. se a aglutinação ocorrer na primeira, segunda e terceira células, então o sangue é do grupo IV (AB).

Para excluir erros, o sangue é testado com soro do grupo 4, onde não deve haver aglutinação.

Fim da manipulação:

1. Retire as luvas e coloque-as em uma solução desinfetante.
2. Lave as mãos e seque com uma toalha.

Observação: A determinação do grupo sanguíneo é realizada em sala com boa iluminação e temperatura de 15 a 25 0C.

Determinação do grupo sanguíneo usando soros padrão

Os grupos sanguíneos são divididos levando em consideração a presença de antígenos aglutinogênicos A e B nos eritrócitos humanos e, consequentemente, anticorpos aglutinínicos a e b no soro sanguíneo. Quando os mesmos aglutinógenos e aglutininas entram em contato, ocorre uma reação de aglutinação (colagem, “formação de areia”) dos eritrócitos, seguida de sua destruição (hemólise). Apenas o aglutinogênio e a aglutinina opostos podem ser encontrados no sangue de cada pessoa. Segundo Jansky, existem 4 grupos sanguíneos; V prática clínica use o conceito de “grupo sanguíneo de acordo com o sistema ABO”.

Para determinar grupos sanguíneos são usados ​​soros isohemaglutinantes padrão. O soro contém aglutininas, que são anticorpos de todos os 4 grupos sanguíneos, e sua atividade é determinada pelo título.

A placa é dividida em 4 quadrados com um lápis de cor e os quadrados I(0), II(A), III(B) são designados no sentido horário. Uma grande gota de soro de duas séries dos grupos I(0), II(A), III(B) é aplicada no quadrado correspondente da placa com uma pipeta. A ponta do dedo é tratada com álcool e a pele é perfurada com uma agulha-lança. A primeira gota de sangue é removida com uma bola de gaze, as gotas subsequentes são adicionadas sequencialmente em gotas de soro usando diferentes cantos de uma lâmina de vidro e bem misturadas. Uma gota de sangue adicionada deve ser 5 a 10 vezes menor que uma gota de soro. Depois, agitando a placa, o sangue e o soro são bem misturados. Os resultados preliminares são avaliados após 3 minutos, após os quais é adicionada uma gota de solução isotônica de cloreto de sódio, misturada novamente agitando a placa e após 5 minutos é realizada a avaliação final da reação de aglutinação.

Com uma reação de isohemaglutinação positiva, flocos e grãos de glóbulos vermelhos pegajosos não se separam quando uma solução isotônica de cloreto de sódio é adicionada e agitada. Se a reação for negativa, as gotas de soro na placa são transparentes, de cor uniformemente rosada e não contêm flocos ou grãos. São possíveis as seguintes 4 combinações de reações de aglutinação com soros padrão dos grupos I(0), II(A), III(B):

Primeiro grupo Segundo grupo

Terceiro grupo Quarto grupo

Conceito de grupos sanguíneos

Grupos sanguíneos AB0

Os grupos sanguíneos do sistema AB0 foram descobertos em 1900 por K. Landsteiner, que, ao misturar as hemácias de alguns indivíduos com o soro sanguíneo de outros indivíduos, descobriu que com algumas combinações o sangue coagula, formando flocos (reação de aglutinação) , mas com outros isso não acontece. Com base nesses estudos, Landsteiner dividiu o sangue de todas as pessoas em três grupos: A, B e C. Em 1907, foi descoberto outro grupo sanguíneo.

Verificou-se que a reação de aglutinação ocorre quando antígenos de um grupo sanguíneo (são chamados de aglutinógenos), que se encontram na cor vermelha células sanguíneas- glóbulos vermelhos com anticorpos de outro grupo (chamados de aglutininas) encontrados no plasma - a parte líquida do sangue. A divisão do sangue de acordo com o sistema AB0 em quatro grupos baseia-se no fato de que o sangue pode ou não conter antígenos (aglutinogênios) A e B, bem como anticorpos (aglutininas) α (alfa ou anti-A) e β (beta ou anti-B) .

Primeiro grupo sanguíneo - 0 (I)

Grupo I - não contém aglutinógenos (antígenos), mas contém aglutininas (anticorpos) α e β. É designado 0 (I). Como este grupo não contém partículas estranhas (antígenos), pode ser transfundido para todas as pessoas. Uma pessoa com esse tipo sanguíneo é um doador universal.

Segundo grupo sanguíneo A β (II)

O Grupo II contém aglutinogênio (antígeno) A e aglutinina β (anticorpos para aglutinogênio B). Portanto, só pode ser transfundido para os grupos que não contêm o antígeno B - são os grupos I e II.

Terceiro grupo sanguíneo Bα (III)

O Grupo III contém aglutinogênio (antígeno) B e aglutinina α (anticorpos para aglutinogênio A). Portanto, só pode ser transfundido para os grupos que não contêm o antígeno A - são os grupos I e III.

Quarto grupo sanguíneo AB0 (IV)

O grupo sanguíneo IV contém aglutinógenos (antígenos) A e B, mas contém aglutininas (anticorpos). Portanto, só pode ser transfundido para quem tem o mesmo quarto grupo sanguíneo. Mas, como não existem anticorpos no sangue dessas pessoas que possam aderir aos anticorpos introduzidos de fora, elas podem ser transfundidas com sangue de qualquer grupo. Pessoas com grupo sanguíneo IV são receptoras universais.

Grupos sanguíneos de acordo com o sistema ABO

Método para determinar grupos sanguíneos

O grupo sanguíneo de acordo com o sistema ABO é determinado pela reação de aglutinação. Atualmente, existem três maneiras de determinar grupos sanguíneos usando o sistema ABO:

De acordo com soros isohemaglutinantes padrão;

Utilizando anticorpos monoclonais (coliclones anti-A e anti-B).

Determinação de grupos sanguíneos usando soros isohemaglutinantes padrão

A essência do método é detectar antígenos dos grupos A e B no sangue testado usando soros padrão. Para esses fins, é utilizada a reação de aglutinação. O teste deve ser feito em sala com boa iluminação e temperatura de 15-25 ° C.

Para realizar o teste são necessários: - Soros isohemaglutinantes padrão dos grupos O (I), A (II), B (III) e AB (IV) de duas séries diferentes. Os soros para determinação de grupos sanguíneos são preparados a partir de sangue de doadores em laboratórios especiais. Os soros são armazenados na geladeira a uma temperatura de 4 - 8 ° C. O prazo de validade do soro está indicado no rótulo. O rótulo também indica o título (diluição máxima do soro em que pode ocorrer uma reação de aglutinação), que não deve ser inferior a 1:32 (para soro B (III) - não inferior a 1:16/32). O soro deve ser transparente, sem sinais de apodrecimento. Por conveniência, os soros padrão são tingidos em uma determinada cor: O (I) - incolor (cinza), A (II) - azul, B (III) - vermelho, AB (IV) - amarelo brilhante. Essas cores acompanham todos os rótulos dos produtos sanguíneos que possuem afiliação a um grupo (sangue, glóbulos vermelhos, plasma, etc.).

Placas de porcelana branca ou esmalte ou outras placas com superfície molhável, marcadas de acordo com os tipos sanguíneos.

Solução isotônica de cloreto de sódio.

Agulhas, pipetas, varetas de vidro (lâminas).

Técnica de reação.

1. Sob as designações apropriadas do grupo sanguíneo, o soro dos grupos I, II, III é aplicado em uma placa (placa) no volume de 0,1 ml (uma gota grande com diâmetro de cerca de 1 cm). Para evitar erros, são aplicadas duas séries de soros, pois uma das séries pode ter baixa atividade e não apresentar aglutinação nítida. Assim, obtêm-se 6 gotas, formando duas fileiras de três gotas na seguinte ordem da esquerda para a direita: 0 (I), A (II), B (III).

2. O sangue para pesquisa é retirado de um dedo ou de uma veia. Utilizando um bastão de vidro seco, 6 gotas do sangue teste, aproximadamente do tamanho de uma cabeça de alfinete de 0,01 ml (gota pequena), são transferidas sucessivamente para a placa em 6 pontos, cada um próximo a uma gota de soro padrão. Além disso, a quantidade de soro deve ser 10 vezes maior que a quantidade de sangue testada. Em seguida, são cuidadosamente misturados com varetas de vidro com bordas arredondadas.

Uma técnica mais simples também é possível: uma gota grande de sangue é aplicada em uma placa, depois é retirada com o canto de uma lâmina de vidro e cada gota de soro é transferida, misturando-a cuidadosamente com a última. Neste caso, o sangue é coletado a cada vez com um canto limpo do copo, tomando cuidado para que as gotas não se misturem.

3. Após misturar as gotas, agite o prato periodicamente. A aglutinação começa nos primeiros 10-30 segundos. Mas a observação deve ser feita por pelo menos 5 minutos, pois é possível aglutinação posterior, por exemplo, com hemácias do grupo A 2 (II).

4. Adicione uma gota de solução isotônica de cloreto de sódio às gotas onde ocorreu a reação, após o que os resultados da reação são avaliados.

A reação de aglutinação pode ser positiva ou negativa

Se a reação for positiva, nos primeiros 10-30 segundos, são observados na mistura pequenos grãos vermelhos (aglutinados), constituídos por glóbulos vermelhos colados, visíveis a olho nu. Os grãos pequenos fundem-se gradualmente em grãos maiores ou mesmo em flocos forma irregular. Numa reação negativa, a gota permanece uniformemente colorida em vermelho.

Os resultados das reações de duas séries em gotas com soro do mesmo grupo devem coincidir.

A pertença do sangue testado ao grupo correspondente é determinada pela presença ou ausência de aglutinação ao reagir com os soros correspondentes.

Se todos os soros deram uma reação positiva, então o sangue de teste contém ambos os aglutinogênios - A e B. Mas nesses casos, para excluir uma reação de aglutinação inespecífica, um teste de controle adicional do sangue de teste deve ser realizado com soro padrão do grupo AB (IV).

Determinação de grupos sanguíneos usando anticorpos monoclonais

Para determinar os grupos sanguíneos por este método, são utilizados anticorpos monoclonais, obtidos por meio da biotecnologia do hibridoma.

O hibridoma é um híbrido celular formado pela fusão de uma célula da medula óssea (mieloma) com um linfócito imune que sintetiza anticorpos monoclonais específicos. O hibridoma tem a capacidade de crescer ilimitadamente, é característico de uma célula tumoral e possui a capacidade inerente de um linfócito de sintetizar anticorpos.

Foram desenvolvidos reagentes padrão: anticorpos monoclonais (mAbs): coliclones anti-A e anti-B, utilizados para a determinação de aglutinogênios eritrocitários. Zoliclones são pós liofilizados de cor vermelha (anti-A) e azul (anti-B), que são diluídos com solução isotônica de cloreto de sódio imediatamente antes da amostra.

Técnica.

As zoliclones anti-A e anti-B são aplicadas em um comprimido branco, uma gota grande (0,1 ml) sob as inscrições apropriadas: anti-A ou anti-B. Uma pequena gota do sangue teste deve ser aplicada ao lado das gotas de anticorpos. Após misturar os componentes, observe a reação de aglutinação por 2-3 minutos. Avaliar os resultados é muito simples.

A determinação do grupo sanguíneo pode ser acompanhada de erros que levam à interpretação incorreta dos resultados. Podem distinguir-se três grupos principais de erros: erros associados a reagentes de baixa qualidade; erros técnicos; erros associados às características Esquema de avaliação dos resultados da determinação dos grupos sanguíneos por meio de anticorpos monoclonais (coliclones anti-A e anti-B) do sangue testado. Os dois primeiros podem ser evitados observando rigorosamente os requisitos acima descritos para soro, condições de reação, etc. O terceiro grupo está associado ao fenômeno de panaglutinação inespecífica (fenômeno de Thomsen), cuja essência é que o soro à temperatura ambiente aglutina com todos os glóbulos vermelhos, mesmo os seus próprios (autoaglutinação), e os eritrócitos ao mesmo tempo dão aglutinação com todos os soros, mesmo com soro do grupo AB. Um fenômeno semelhante foi descrito em várias doenças: doenças do sangue, esplenomegalia, cirrose hepática, doenças infecciosas etc. Panaglutinação e autoaglutinação em pessoas saudáveis ​​também foram descritas.

O fenômeno de panaglutinação e autoaglutinação é observado apenas à temperatura ambiente. Se a determinação da pertença ao grupo for efectuada a uma temperatura de 37 ° C, eles desaparecem.

Deve ser estritamente lembrado que em todos os casos de resultados pouco claros ou questionáveis, os grupos sanguíneos devem ser redeterminados utilizando soros padrão de outras séries, bem como de forma transversal.

Determinação do grupo sanguíneo usando soros isohemaglutinantes padrão (método direto).

Esses soros são produzidos pelas estações de transfusão de sangue em frascos ou ampolas de 5 ml, tingidos de acordo com o grupo sanguíneo.

O rótulo deve indicar:

nome da instituição onde foi produzido o soro;

afiliação de grupo de soro com indicação obrigatória de aglutininas;

número de série;

título de aglutinina sérica;

melhor antes da data;

Soros com título de aglutinina de pelo menos 1:32 são adequados para a reação.

Os soros são armazenados na geladeira a uma temperatura de +2-4ºС. O soro pode ser congelado - pode ser usado após o descongelamento. Antes de usar, deve-se certificar-se de que não há flocos ou sedimentos no soro e que ele manteve a cor correspondente ao grupo. Antes de iniciar a reação, o soro deve ser aquecido à temperatura ambiente (+15-25ºС) por 30-40 minutos. A placa ou placa na qual a reação é realizada também deve estar à temperatura ambiente.

Técnica para determinar o grupo sanguíneo usando soros padrão

Equipamento:

Soros isohemaglutinantes padrão dos grupos Oαβ(I), Aβ(II), Bα(III) de duas séries e soro do grupo ABo(IV) de uma série.

Solução isotônica de cloreto de sódio.

Porcelana branca ou quaisquer outras placas (pratos) com superfície molhada, divididas em quatro setores, designados de acordo com os grupos sanguíneos.

Pipetas rotuladas para cada grupo sanguíneo e série de soro.

Varetas de vidro ou plástico com pontas arredondadas para misturar sangue.

Técnica:

O sobrenome e as iniciais do paciente estão escritos na borda da placa (placa).

Sob as designações apropriadas, gotas (aproximadamente 0,1 ml) de soros dos grupos Oαβ (I), Aβ (II), Bα (III) de duas séries são aplicadas na placa (placa). O soro é retirado de cada frasco com uma pipeta separada, que permanece no frasco.

O sangue para pesquisa é retirado do local da injeção da polpa da falange terminal do dedo. Você também pode usar inteiro sangue venoso ou uma suspensão de glóbulos vermelhos após coagulação ou centrifugação do sangue com Ht de pelo menos 30%. Aproximadamente 0,01 ml de gotas de sangue são aplicadas sequencialmente com um bastão de vidro em uma placa (placa) ao lado de uma gota de soro padrão. Assim, a proporção de sangue e soro é de 1:10.

Usando um bastão de vidro, misture gotas de sangue e soro até que a mistura fique uniformemente rosada. É necessário usar um bastão novo a cada vez, ou após cada agitação, enxaguar o bastão em um copo com solução salina e secar com gaze limpa ou algodão.

Após a mistura, a placa é suavemente balançada nas mãos até que o tempo de reação tenha decorrido. Isto evita a aglutinação inespecífica de glóbulos vermelhos (“falsa aglutinação”).

O resultado da reação é avaliado após 5 minutos. Se ocorrer aglutinação com soros de todos os grupos, reação semelhante é realizada com soro do quarto grupo, uma série. A conclusão de que o sangue pertence ao grupo IV é feita na ausência de aglutinação com soro do grupo IV. Se os resultados da reação forem questionáveis, após 5 minutos, 1-2 gotas de solução isotônica de cloreto de sódio podem ser adicionadas às gotas onde ocorreu a aglutinação e a placa pode ser levemente agitada. A “falsa aglutinação” desaparecerá.

Interpretação dos resultados da reação

A reação de hemaglutinação pode ser positiva e negativa. Com uma reação positiva, formam-se aglutinantes que se parecem com grãos ou flocos, e uma gota de soro isohemaglutinante fica quase completamente descolorida. Se a reação for negativa, o soro permanece rosado e não são detectados aglutinantes. Os resultados das reações com soros do mesmo grupo de lotes diferentes devem ser iguais.

É necessário ressaltar que de acordo com as novas “Instruções para uso de hemocomponentes” (2002), em contraste com as Instruções de 1998, foram feitas as seguintes alterações na técnica do método direto para determinação de grupos sanguíneos:

A proporção de sangue e soro é de 1:10. Anteriormente – 1:5 – 1:7.

A adição de solução salina é realizada somente após 5 minutos, ou seja, após decorrido o período de reação. Anteriormente, uma solução isotônica de cloreto de sódio era adicionada à medida que ocorria aglutinação, mas não antes de 3 minutos. desde o início da reação.

O método direto de determinação do grupo sanguíneo, mesmo que executado tecnicamente de forma impecável, envolve, embora uma probabilidade de erro muito pequena (fração de um por cento), mas confiável. As principais razões para possíveis erros são a presença de subgrupos e “quimeras de sangue”. Para eliminar possíveis erros, o resultado da reação direta é verificado.

Determinação do grupo sanguíneo usando soros isohemaglutinantes pareados padrão.

1. Introdução: Realizamos tipagem sanguínea com soros padrão na sala de tratamento conforme prescrição médica. Estou de boné, óculos, máscara, roupão, avental, luvas. As mãos são pré-tratadas de forma higiênica.

2 Equipamentos:

Soros padrão de duas séries

Teste o sangue em um tubo de ensaio

Placa para determinação do grupo sanguíneo.

Quatro varetas de vidro estéreis (em um copo, placa de Petri)

Solução isotônica de cloreto de sódio (tubo de ensaio)

Pipetas estéreis 2 unid.

Recipiente com solução de cloramina a 3%.

3 Realizando a manipulação

Adicione uma gota (0,1 ml) de soro padrão em poços separados.

Coloque uma gota grande de sangue em uma placa próxima ao poço do 4º grupo, a uma distância de pelo menos 1 cm dele.

Usando extremidades separadas de bastões de vidro, adicione sangue ao soro (proporção 10:1), misture

Agitar a placa durante 5 minutos e observar a aglutinação.

Adicione solução salina (0,1 ml) aos poços onde ocorreu aglutinação.

Agite a placa e observe a aglutinação.

Formulário de resposta:

Ao determinar o grupo sanguíneo com soros padrão

Não se observa aglutinação em nenhum dos poços - primeiro grupo

Aglutinação é observada no primeiro e terceiro poços - segundo grupo

Aglutinação é observada no primeiro e segundo poços - terceiro grupo

Aglutinação é observada em todos os poços - provavelmente no quarto grupo

Determinamos o resultado com soro do quarto grupo (da mesma forma)

Formulário de resposta:

Com soro do quarto grupo não se observa aglutinação - quarto grupo

Com o soro do quarto grupo não se observa aglutinação - é impossível determinar o tipo sanguíneo, o soro deve ser reposto.

Após a manipulação, mergulhe todos os objetos contaminados com sangue em uma solução de cloramina a três por cento por uma hora.

4 Possíveis erros:

Erros grosseiros:

Não utilização de equipamento de proteção dos profissionais de saúde.

Reutilizando pauzinhos.

Transfira os palitos que entraram em contato com sangue sobre uma bandeja com palitos limpos.

O padrão de aglutinação não corresponde à conclusão sobre a pertença ao grupo.

Objetos em contato com sangue não são desinfetados

Não-erros:

O tempo de espera da aglutinação é inferior a 5 minutos.

Nenhuma solução salina foi adicionada aos poços onde ocorreu aglutinação.

Segure os palitos pelas pontas e não pelo centro.

5 Critérios de avaliação:

Aprovado – sem erros graves, não mais do que dois erros menores.

Não passou - presença de erros, presença de mais de dois não erros.

Se for cometido um erro grave, o professor pode pedir que você repita a etapa correspondente da manipulação. Se o erro se repetir, você falha. Não é permitida mais de uma repetição.

Os materiais são publicados apenas para fins informativos e não constituem uma receita de tratamento! Recomendamos que você consulte um hematologista da sua instituição médica!

O tipo sanguíneo e o fator Rh são proteínas especiais que determinam seu caráter individual, assim como a cor dos olhos ou do cabelo de uma pessoa. O grupo Rh e Rh são de grande importância na medicina no tratamento de perdas sanguíneas, doenças do sangue, e também afetam a formação do corpo, o funcionamento dos órgãos e até características psicológicas pessoa.

Conceito de grupo sanguíneo

Até os médicos antigos tentaram repor a perda de sangue por meio de transfusão de sangue de pessoa para pessoa e até de animais. Via de regra, todas essas tentativas tiveram um desfecho triste. E somente no início do século XX, o cientista austríaco Karl Landsteiner descobriu diferenças nos grupos sanguíneos das pessoas, que eram proteínas especiais nos glóbulos vermelhos - aglutinógenos, isto é causando uma reação aglutinação - união de glóbulos vermelhos. Foi isso que causou a morte de pacientes após transfusão de sangue.

Foram estabelecidos dois tipos principais de aglutinogênios, que são convencionalmente denominados A e B. A adesão das hemácias, ou seja, a incompatibilidade sanguínea, ocorre quando o aglutinogênio se combina com a proteína de mesmo nome - aglutinina, contida no sangue plasma, respectivamente, a e b. Isso significa que no sangue humano não pode haver proteínas com o mesmo nome que façam com que os glóbulos vermelhos se unam, ou seja, se houver aglutinogênio A, então não pode haver aglutinina A nele.

Também foi descoberto que o sangue pode conter ambos os aglutinógenos - A e B, mas não contém nenhum tipo de aglutinina e vice-versa. Todos esses são os sinais que determinam o tipo sanguíneo. Portanto, quando as proteínas de mesmo nome nos glóbulos vermelhos e no plasma se combinam, desenvolve-se um conflito de grupo sanguíneo.

Tipos de grupos sanguíneos

Com base nesta descoberta, quatro tipos principais de grupos sanguíneos foram identificados em humanos:

• 1º, que não contém aglutinógenos, mas contém ambas as aglutininas a e b, é o tipo sanguíneo mais comum, possuído por 45% da população mundial;
• 2º, contendo aglutinogênio A e aglutinina b, é detectado em 35% das pessoas;
• 3º, que contém aglutinogênio B e aglutinina A, 13% das pessoas possuem;
• 4º, contendo aglutinógenos A e B, e não contendo aglutininas, esse tipo sanguíneo é o mais raro, é determinado apenas em 7% da população.

Na Rússia, aceita-se a designação do grupo sanguíneo de acordo com o sistema AB0, ou seja, de acordo com o conteúdo de aglutinógenos nele contido. De acordo com isso, a tabela de grupos sanguíneos fica assim:

O grupo sanguíneo é herdado. Seu tipo sanguíneo pode mudar?A resposta a esta pergunta é clara: não pode. Embora a história da medicina conheça apenas um caso associado a mutações genéticas. O gene que determina o tipo sanguíneo está localizado no 9º par do conjunto de cromossomos humanos.

Importante! O julgamento sobre qual grupo sanguíneo é adequado para todos perdeu hoje relevância, assim como o conceito de doador universal, ou seja, o dono do 1º (zero) grupo sanguíneo. Muitos subtipos de grupos sanguíneos foram descobertos e apenas sangue do mesmo tipo é transfundido.

Fator Rh: negativo e positivo

Apesar da descoberta dos grupos sanguíneos por Landsteiner, as reações transfusionais continuaram a ocorrer durante as transfusões. O cientista continuou sua pesquisa e, junto com seus colegas Wiener e Levine, conseguiu descobrir outro antígeno-proteína específico dos eritrócitos - o fator Rh. Foi identificado pela primeira vez no macaco rhesus, daí seu nome. Descobriu-se que o Rh está presente no sangue da maioria das pessoas: 85% da população possui esse antígeno e 15% não o possui, ou seja, possui fator Rh negativo.

A peculiaridade do antígeno Rh é que, ao entrar no sangue de pessoas que não o possuem, promove a produção de anticorpos anti-Rh. Após contato repetido com o fator Rh, esses anticorpos provocam uma reação hemolítica grave, chamada de conflito Rh.

Importante! Quando o fator Rh é negativo, isso não significa simplesmente a ausência do antígeno Rh nas hemácias. Anticorpos anti-Rh podem estar presentes no sangue, que podem ser formados durante o contato com sangue Rh positivo. Portanto, a análise da presença de anticorpos Rh é obrigatória.

Determinação do grupo sanguíneo e fator Rh

O tipo sanguíneo e o fator Rh estão sujeitos a determinação obrigatória nos seguintes casos:

• para transfusões de sangue;
• para transplante de medula óssea;
• antes de qualquer operação;
• durante a gravidez;
• para doenças do sangue;
• em recém-nascidos com icterícia hemolítica (incompatibilidade de Rhesus com a mãe).

No entanto, idealmente, todas as pessoas, tanto adultos como crianças, deveriam ter informações sobre o grupo e a afiliação Rh. Casos de ferimentos graves ou Doença aguda quando o sangue pode ser necessário com urgência.

Determinação do grupo sanguíneo

A determinação do grupo sanguíneo é realizada com anticorpos monoclonais especialmente obtidos de acordo com o sistema AB0, ou seja, aglutininas séricas, que provocam a adesão de hemácias ao entrar em contato com aglutinogênios de mesmo nome.

O algoritmo para determinar o grupo sanguíneo é o seguinte:

1. Prepare coliclones (anticorpos monoclonais) anti-A - ampolas rosa e anti-B - ampolas azuis. Prepare 2 pipetas limpas, varetas de vidro para misturar e lâminas de vidro, uma seringa descartável de 5 ml para tirar sangue e um tubo de ensaio.
2. O sangue é retirado de uma veia.
3. Uma gota grande de zoliclones (0,1 ml) é aplicada em uma lâmina de vidro ou placa especial marcada; pequenas gotas do sangue sendo testado (0,01 ml) são misturadas com bastões de vidro separados.
4. Observe o resultado por 3-5 minutos. Uma gota com sangue misto pode ser homogênea - uma reação negativa (-), ou cair flocos - uma reação positiva ou aglutinação (+). Os resultados devem ser avaliados por um médico. As opções para testar a determinação do grupo sanguíneo são apresentadas na tabela:

Determinação do fator Rh

A determinação do fator Rh é realizada de forma semelhante à determinação do grupo sanguíneo, ou seja, utilizando um anticorpo sérico monoclonal para o antígeno Rh. Uma gota grande do reagente (zoliclone) e uma pequena gota de sangue recém-colhido são aplicadas sobre uma superfície especial de cerâmica branca e limpa, nas mesmas proporções (10:1). O sangue é cuidadosamente misturado com uma vareta de vidro e o reagente.

Determinar o fator Rh com zoliclones leva menos tempo, porque a reação ocorre em 10-15 segundos. Porém, é necessário manter um período máximo de 3 minutos. Assim como no caso da determinação do grupo sanguíneo, o tubo de ensaio com sangue é enviado ao laboratório.

EM prática médica Hoje, um método expresso conveniente e rápido para determinar a afiliação de grupo e o fator Rh é amplamente utilizado usando coliclones secos, que são diluídos com água estéril para injeção imediatamente antes do estudo. O método é denominado “cartão do grupo Erythrotest”, é muito conveniente tanto em clínicas, em condições extremas, quanto em condições de campo.

Caráter e saúde de uma pessoa por tipo sanguíneo

O sangue humano como característica genética específica ainda não foi totalmente estudado. Nos últimos anos, os cientistas descobriram variantes de subgrupos sanguíneos, estão desenvolvendo novas tecnologias para determinar a compatibilidade e assim por diante.

O sangue também é creditado com a capacidade de influenciar a saúde e o caráter de seu dono. E embora esta questão permaneça controversa, muitos anos de observações notaram Fatos interessantes. Por exemplo, pesquisadores japoneses acreditam que é possível determinar o caráter de uma pessoa pelo seu tipo sanguíneo:

• os donos do 1º grupo sanguíneo são pessoas obstinadas, fortes, sociáveis ​​​​e emotivas;
• os proprietários do 2º grupo distinguem-se pela paciência, escrupulosidade, perseverança e trabalho árduo;
• os representantes do 3º grupo são indivíduos criativos, mas ao mesmo tempo muito impressionáveis, dominadores e caprichosos;
• pessoas com grupo sanguíneo 4 vivem mais pelos sentimentos, são caracterizadas pela indecisão e às vezes são injustificadamente duras.

Quanto à saúde em função do tipo sanguíneo, acredita-se que seja mais forte na maioria da população, ou seja, no grupo 1. Pessoas do grupo 2 são propensas a doenças cardíacas e doenças oncológicas, os proprietários do 3º grupo são caracterizados por imunidade fraca, baixa resistência a infecções e estresse, e os representantes do 4º grupo são propensos a patologia cardiovascular, doenças articulares, câncer.

Hoje em dia, a medicina atingiu grandes alturas. Os médicos são capazes de realizar operações de longo prazo e salvar pessoas mesmo nas situações aparentemente mais desesperadoras em termos de sobrevivência. Porém, nesses casos é preciso enfrentar o problema da necessidade de transfusão de sangue. Por muito tempo isso não foi viável devido ao fato de os pacientes morrerem muito rapidamente. Mas essa questão foi resolvida com a descoberta do conceito de grupos sanguíneos, ou melhor, a detecção de antígenos nos eritrócitos e, por sua vez, de anticorpos no plasma sanguíneo.

Determinação do grupo sanguíneo usando soros padrão

O que é tipo sanguíneo

No início do século XX, o médico australiano e cientista em tempo parcial K. Landsteiner descobriu a presença de antígenos e anticorpos no sangue. Os antígenos são encontrados na superfície dos glóbulos vermelhos. Existem 2 tipos deles. Para simplificar, os biólogos os designaram como A e B. Por sua vez, os anticorpos estão contidos no plasma sanguíneo e são chamados de α e β. Se A estiver conectado a α e B a β, o processo de coagulação do sangue começará. Essa reação é chamada de hemaglutinação.

Assim, a partir dos conjuntos de antígenos e anticorpos disponíveis, é possível criar 4 tipos de sangue, mostrados na tabela abaixo:

Grupos sanguíneos e caráter

Importante! Dependendo do tipo de sangue do doador fornecido para transfusão, o sangue do paciente coagula ou não. O primeiro caso é fatal.

Soros para reação

Atualmente, há um grande número de maneiras de determinar o tipo sanguíneo. Mas a maioria deles é projetada para análise em grandes laboratórios. Porém, mesmo que você esteja em uma pequena vila ou em um local onde não há como entrar em contato com essas instituições, ainda permanece a possibilidade de identificar o número do seu grupo sanguíneo.

A determinação do grupo sanguíneo é realizada por meio de quatro soros padrão especiais, que serão produzidos a partir de sangue humano. Estão disponíveis em frascos ou em ampolas de 2-5 ml e correspondem a grupos diferentes sangue:

1. 0. Vem com etiqueta branca e é de cor transparente.
2. A. Líquido azul. Duas listras azuis são aplicadas ao frasco.
3. B. Líquido rosa pálido. Existem três listras da mesma cor no frasco.
4. AB. Líquido amarelo. O frasco possui 4 listras da mesma cor.

Soros para testes de grupo sanguíneo

Importante! Na verdade, estes reagentes são incolores quando fabricados. São pintados especialmente para que seja impossível confundi-los na hora de usá-los.

Também nos rótulos estão:

• título;
• data de fabricação;
• melhor antes da data;
• informações do fabricante;
• número de série.

Como o tipo sanguíneo é determinado?

Para determinar seu tipo sanguíneo você precisará de:

• placa plana com 8 reentrâncias;
• bastões de vidro ou pipetas - 8 peças;
• 2 conjuntos de soros de séries diferentes para eliminar a possibilidade de erros;
• normal ou ampulheta.

Instrumentos para determinação de sangue usando soros padrão

Os soros são colocados em 2 fileiras em uma placa plana, após a qual são retiradas varetas de vidro. Com a ajuda deles, o sangue testado é introduzido nas fileiras. Ela mexe com esses palitos, depois o prato começa a balançar. Se você tiver sorte, o processo pode ser monitorado em 10 a 30 segundos, mas é melhor fazer isso por até 5 minutos para eliminar a possibilidade de uma reação lenta. Em seguida, os resultados obtidos são estudados e decifrados.

Atenção! Em primeiro lugar, deve-se prestar atenção às canecas nas quais foi derramado o soro dos grupos sanguíneos II e III. É interessante a presença de pequenos flocos que aparecem como resultado da aglutinação - aglomeração de glóbulos vermelhos.

1. Se não houver flocos em II ou III, e durante uma verificação adicional, nada coagulou em I ou IV, então há um primeiro grupo sanguíneo.
2. Se, como resultado, a coagulação for observada em todos os lugares, exceto no soro do grupo II, então o sangue testado pertence ao segundo grupo.
3. Se a coagulação for observada em todas as amostras, exceto no soro do grupo III, então o sangue testado pertence ao grupo de mesmo nome.
4. Se a coagulação ocorreu em todas as amostras, exceto no soro do grupo IV, então o grupo sanguíneo de mesmo nome foi analisado.

Determinação do grupo sanguíneo

Importante: a rigor, o tipo sanguíneo pode ser determinado tendo apenas os grupos sanguíneos 2 e 3 no soro. Porém, como se pode concluir pela essência do método, há uma grande influência do fator humano. Por esse motivo, os soros dos grupos sanguíneos I e IV são utilizados como teste adicional.

Após o procedimento, os utensílios utilizados devem ser bem enxaguados com água morna e secos. Ele pode então ser usado para pesquisas futuras.

Resultados imprecisos e suas razões

Às vezes acontece que coágulos de glóbulos vermelhos grudados não são claramente visíveis. Muitas vezes, uma solução isotônica de cloreto de sódio pode ser adicionada durante o teste. Elimina a possibilidade de falsa aglutinação, fazendo com que os flocos que não resultaram do processo de coagulação se desintegrem.

Importante! Se o resultado da análise não for muito visível, deve-se refazê-la e utilizar um microscópio para examinar a aglutinação fina.

No caso de um resultado claramente identificado, você pode informar imediatamente com precisão ao paciente seu tipo sanguíneo. Caso contrário, você deverá recorrer a outros métodos de análise.

Não devemos esquecer a possibilidade de erros, que geralmente ocorrem pelos seguintes motivos:

• uso de whey vencido ou fraco;
• Usa também grande quantidade o sangue testado em relação ao volume de soro;
• a reação demora muito mais tempo do que o exigido pelos regulamentos;
• temperatura ambiente não corresponde ao normal, resultando em aglutinação a frio dos glóbulos vermelhos.

Maioria razões comuns erros na determinação de grupos sanguíneos

Além disso, é importante ressaltar que durante o processo de secagem podem se formar áreas granulares nas bordas da mistura de soro e sangue teste, que não podem servir como indicadores de reação.

Usando o resultado na prática

Como já mencionado, a determinação do grupo sanguíneo é realizada para excluir a morte durante a transfusão de sangue. O ideal é que o paciente que recebe sangue – o receptor – receba uma transfusão de sangue do mesmo tipo que o seu. No entanto, nem sempre é esse o caso. Até porque o número esmagador de pessoas com o primeiro grupo sanguíneo é de 50%. Ao mesmo tempo, são doadores universais porque carecem de aglutinógenos que estimulam o processo de coagulação do sangue.

Atenção! Já os pacientes do grupo sanguíneo IV podem ser chamados de receptores universais, pois seu corpo é capaz de aceitar sangue de qualquer grupo. Ao mesmo tempo, seu sangue não pode ser transfundido para representantes de outro grupo.

Para ilustrar a compatibilidade de doadores e receptores, apresentamos uma tabela:

Compatibilidade de grupo sanguíneo

EM mundo moderno Conhecer seu tipo sanguíneo é vital. Do ponto de vista dos médicos, a taxa de sobrevivência dos pacientes dependerá disso. Do ponto de vista das pessoas comuns, esta é uma oportunidade situação de emergência Salve sua vida. Neste sentido, não será supérfluo conhecer o seu tipo sanguíneo e, se possível, incluí-lo no passaporte ou noutros documentos, pois a qualquer momento pode surgir um risco para a saúde e a vida.

Vídeo - Determinação do grupo sanguíneo

Vídeo - Determinação do tipo sanguíneo e fator Rh