Βακτηριολογικές μελέτες. Βακτηριολογική έρευνα Βακτηριολογική μέθοδος διάγνωσης μολυσματικών ασθενειών

Σχετικά με την εταιρεία

Δεν είστε ικανοποιημένοι με την ποιότητα των προϊόντων που παρέχονται στο εργαστήριο; Δοκιμάστε να συνεργαστείτε μαζί μας. Όλα τα προϊόντα μας κατασκευάζονται σύμφωνα με τα υψηλότερα διεθνή πρότυπα και διαθέτουν πιστοποιητικά εγγραφής από το Υπουργείο Υγείας της Ουκρανίας. Δείτε αυτό μόνοι σας. Κάντε μια δοκιμαστική παραγγελία.

Βακτηριολογικές μελέτες

Βακτηριολογική έρευνα- προορίζεται για την απομόνωση βακτηρίων και τη μελέτη των ιδιοτήτων τους προκειμένου να γίνει μικροβιολογική διάγνωση.
Το υλικό δοκιμής θα πρέπει να συλλέγεται υπό άσηπτες συνθήκες σε αποστειρωμένα δοχεία και να παραδίδεται στο εργαστήριο το συντομότερο δυνατό. Εάν είναι απαραίτητο, τα δείγματα πρέπει να φυλάσσονται στο ψυγείο. Η τεχνική δειγματοληψίας εξαρτάται από το αντικείμενο, τη φύση της νόσου και τις ιδιότητες του μικροοργανισμού. Μία από τις κοινές μεθόδους βακτηριολογικής έρευνας είναι η βακτηριοσκόπηση.
Για τη μελέτη των μη στερεωμένων βακτηρίων, χρησιμοποιούνται δύο μέθοδοι: μια θρυμματισμένη σταγόνα (ανάμεσα στη διαφάνεια και το γυαλί καλύμματος) και μια κρεμαστή σταγόνα. Θα πρέπει να θυμόμαστε ότι τα παρασκευάσματα μη σταθεροποιημένων βακτηρίων είναι μολυσματικά.
Τα πιο σημαντικά στοιχεία της βακτηριολογικής έρευνας περιλαμβάνουν τον ενοφθαλμισμό και την υποκαλλιέργεια βακτηριακών καλλιεργειών που πραγματοποιούνται με βακτηριακό βρόχο ή πιπέτα Παστέρ. Η θηλιά αποστειρώνεται με ανόπτηση σε φλόγα και στη συνέχεια ψύχεται αγγίζοντας μια περιοχή μη εμβολιασμένου άγαρ ή με έκπλυση σε αποστειρωμένο υγρό. Όταν χρησιμοποιείτε μια πιπέτα Pasteur, κόψτε το άκρο με ένα τσιμπιδάκι, περάστε το σιφώνιο μέσα από τη φλόγα του καυστήρα αρκετές φορές και αφήστε το να κρυώσει. Κατά τη σπορά, χρησιμοποιούνται υγρά και στερεά θρεπτικά μέσα. Όταν σπαρθεί σε λοξό άγαρ, η βακτηριακή καλλιέργεια τρίβεται με ένα βρόχο στην επιφάνεια του άγαρ. Κατά τη σπορά στο πάχος μιας στήλης άγαρ ή ζελατίνης, το θρεπτικό μέσο τρυπάται στο κάτω μέρος του σωλήνα με μια θηλιά ή μια ειδική βελόνα. Κατά τη σπορά σε υγρό υπόστρωμα, πρέπει να λαμβάνεται μέριμνα ώστε το υγρό να μην χυθεί και να βρέξει τις άκρες των σωλήνων και των πωμάτων. Οι εμβολιασμοί και οι υποκαλλιέργειες πρέπει να πραγματοποιούνται κοντά στη φλόγα ενός καυστήρα αερίου, οι δοκιμαστικοί σωλήνες δεν πρέπει να παραμένουν ανοιχτοί για πολύ, ο βρόχος ή η πιπέτα Παστέρ με την καλλιέργεια δεν πρέπει να αγγίζουν τίποτα. Πριν κλείσετε τον δοκιμαστικό σωλήνα, οι άκρες πρέπει να καούν. Τα εμβολιασμένα σωληνάρια πρέπει να επισημαίνονται αμέσως.

Οι μέθοδοι μικροβιολογικής έρευνας χωρίζονται σεμέθοδοι άμεσης ανίχνευσης παθογόνων στο σώμα του ασθενούς - βακτηριοσκοπικές και βακτηριολογικές μελέτες. μέθοδοι έμμεσης απόδειξης της παρουσίας παθογόνου στο σώμα του ασθενούς - ορολογικές μελέτες με στόχο την ανίχνευση συγκεκριμένων αντιγόνων σε μολυσμένο υλικό ή αντισωμάτων στον ορό αίματος και διάφορες εκκρίσεις του σώματος του ασθενούς.
Βακτηριοσκοπική εξέταση αίματος, ούρων, εγκεφαλονωτιαίο υγρό, βλέννα από το λαιμό και τη μύτη, τα κόπρανα και διάφορα παθολογικά υποστρώματα για την παρουσία παθογόνου χρησιμοποιούνται για πολλά μολυσματικές ασθένειες. Αυτή η μέθοδος έχει μάλλον περιορισμένες εφαρμογές, αν και είναι πολύ σημαντική. Χρησιμοποιείται, ειδικότερα, για την ανίχνευση παθογόνων μικροοργανισμών της ελονοσίας, του υποτροπιάζοντος πυρετού και της λεπτοσπείρωσης στο αίμα. Το εγκεφαλονωτιαίο υγρό εξετάζεται για πυώδη και φυματιώδη μηνιγγίτιδα, βλέννα από το λαιμό και τη μύτη - για διφθερίτιδα, στηθάγχη του Vincent, κόπρανα - για αμοιβίαση, βαλαντιδίαση, γιαρδίαση. ούρα - για λεπτοσπείρωση. Οι βάκιλοι της πανώλης και του άνθρακα μπορούν να φανούν στη σημείωση της πανώλης και τα επιχρίσματα αποτυπωμάτων που λαμβάνονται από το καρμπούνι του άνθρακα. μικροσκόπηση ενός σημειακού επιχρίσματος από το μυελό των οστών και τη σπλήνα, οι κοκκοποιήσεις από ένα έλκος μπορούν να ανιχνεύσουν λεϊσμανία. στα πτύελα - Mycobacterium tuberculosis. Το πλεονέκτημα της βακτηριοσκοπικής μεθόδου είναι η ταχύτητά της. Τα αποτελέσματα της ανάλυσης μπορούν να ληφθούν μέσα σε λίγες ώρες. Σε ορισμένες ασθένειες (ελονοσία, επιδημική εγκεφαλονωτιαία μηνιγγίτιδα κ.λπ.), παθογόνα μπορούν να ανιχνευθούν στο σώμα του ασθενούς ήδη την 1η ημέρα της νόσου, κάτι που είναι πολύ σημαντικό για την έγκαιρη διάγνωση και θεραπεία. Οι δυνατότητες βακτηριοσκοπικής διάγνωσης έχουν διευρυνθεί σημαντικά λόγω της θεραπείας σκευασμάτων με ειδικούς ορούς που περιέχουν αντισώματα έναντι ενός δεδομένου παθογόνου, σημασμένους με φθοριόχρωμα (μέθοδος ανοσοφθορισμού) ή ένζυμα (μέθοδος ενζυμικής ανοσοδοκιμασίας). Σε αυτή την περίπτωση, τα επισημασμένα αντισώματα συνδυάζονται με ένα αντιγόνο, το οποίο ανιχνεύεται χρησιμοποιώντας τη μέθοδο ανοσοφθορισμού σε μικροσκόπιο φθορισμού και με τη μέθοδο ενζυμικής ανοσοδοκιμασίας - με χρώση του προϊόντος ενζυματικής αντίδρασης μετά την εισαγωγή ενός μείγματος υποστρώματος-δείκτη.
Βακτηριολογική μέθοδοςΗ διάγνωση βασίζεται στην απομόνωση του παθογόνου από το αίμα, το εγκεφαλονωτιαίο υγρό, τα πτύελα, τη βλέννα από το λαιμό και τη μύτη, τα κόπρανα, τα ούρα, τη χολή του ασθενούς και σε περίπτωση θανάτου - από κομμάτια οργάνων που έχουν ενοφθαλμιστεί σε ειδική θρεπτική ουσία μέσα ενημέρωσης. Τα βακτηριολογικά διαγνωστικά χρησιμοποιούνται ευρέως για την εξέταση βλέννας από το λαιμό και τη μύτη για βακτήρια διφθερίτιδας και για την απομόνωση παθογόνων εντερικές λοιμώξεις(για παράδειγμα, χολέρα, δυσεντερία, σαλμονέλωση, εσχερχίωση) από τα κόπρανα του ασθενούς, παθογόνα πνευμονίας - από πτύελα και σε άλλες περιπτώσεις. Παράλληλα, τα χαρακτηριστικά της ύποπτης λοίμωξης, ο τόπος επιλεκτικής εντόπισης του παθογόνου και οι οδοί απομόνωσής του σε περιβάλλο. Η μελέτη δίνει θετικά αποτελέσματα ήδη τις πρώτες ώρες ή ημέρες της ασθένειας. Ωστόσο, το εργαστήριο αναφέρει την τελική απάντηση για τις περισσότερες μολυσματικές ασθένειες μόνο μετά από 2-4 ημέρες, και για τη βρουκέλλωση και τη φυματίωση - μετά από 3-4 εβδομάδες. Αυτό εξαρτάται από τον χρόνο που απαιτείται για την ανάπτυξη των μικροοργανισμών και την ταυτοποίησή τους (βιοχημική και ορολογική). Κάθε μικρόβιο χρειάζεται ένα κατάλληλο θρεπτικό μέσο για την ανάπτυξή του. Ανάλογα με το μικρόβιο που υποτίθεται ότι θα απομονωθεί (κάτι που προσδιορίζεται κατά την κλινική και επιδημιολογική εξέταση του ασθενούς), επιλέγεται το κατάλληλο θρεπτικό μέσο. Μερικές φορές η σπορά πραγματοποιείται ταυτόχρονα σε πολλά θρεπτικά μέσα. Η αξία των αποτελεσμάτων των βακτηριολογικών μελετών καθορίζεται σε μεγάλο βαθμό από το εάν το υλικό λαμβάνεται σωστά από τον ασθενή και εάν παραδίδεται σωστά στο εργαστήριο. Το μολυσματικό υλικό συλλέγεται σε αποστειρωμένα δοχεία, τηρώντας ασηπτικούς κανόνες.

Το πιο σημαντικό στάδιο της βακτηριολογικής έρευνας είναι η ταυτοποίηση- προσδιορισμός του είδους ή του τύπου των βακτηρίων που λαμβάνονται με τη μορφή καθαρής καλλιέργειας. Κατά την αναγνώριση βακτηρίων, μελετώνται οι φυσιολογικές και βιοχημικές τους ιδιότητες και ο σχηματισμός τοξινών. Οι ορολογικές μέθοδοι για την αναγνώριση βακτηρίων χρησιμοποιούνται ευρέως. Σε πολλές περιπτώσεις, μια βιολογική μέθοδος για την αναγνώριση μικροοργανισμών είναι αποτελεσματική, που βασίζεται στη μόλυνση των εργαστηριακών ζώων με το υλικό που μελετάται ή την προκύπτουσα βακτηριακή καλλιέργεια και στον εντοπισμό χαρακτηριστικών παθολογικών αλλαγών στα ζώα.
Για την απομόνωση καθαρών καλλιεργειών χρησιμοποιούνται μηχανικές και βιολογικές μέθοδοι. Ένα παράδειγμα μηχανικής μεθόδου: μια σταγόνα του υλικού δοκιμής αλέθεται με την ίδια στείρα σπάτουλα ή βακτηριακό βρόχο πάνω από την επιφάνεια ενός πυκνού θρεπτικού μέσου, διαδοχικά στο πρώτο, το δεύτερο και το τρίτο τρυβλίο Petri. Η απομόνωση μιας καθαρής καλλιέργειας γίνεται από αναπτυγμένες μεμονωμένες αποικίες και συνίσταται στην εξέταση και διαλογή τους σε ένα φρέσκο ​​θρεπτικό μέσο. Οι βιολογικές μέθοδοι για την απομόνωση καθαρών καλλιεργειών βασίζονται στο να λαμβάνεται υπόψη η μία ή η άλλη ιδιότητα του απομονωμένου μικροβίου, η οποία το διακρίνει από άλλα μικρόβια που βρίσκονται στο υπό μελέτη υλικό.
Η βιολογική μέθοδος χρησιμοποιεί αυτού του είδους τα θρεπτικά μέσα στα οποία δημιουργούνται συνθήκες που είναι ευνοϊκές για την ανάπτυξη ενός συγκεκριμένου τύπου μικροβίου. Οι βιολογικές μέθοδοι περιλαμβάνουν επίσης μόλυνση εργαστηριακών ζώων που είναι ευαίσθητα στα απομονωμένα είδη βακτηρίων.
Η βακτηριολογική έρευνα είναι ένα σύνολο μεθόδων για τον εντοπισμό παθογόνων μικροοργανισμών σε έναν ασθενή, έναν φορέα ή σε αντικείμενα εξωτερικό περιβάλλον.

Απομόνωση καθαρού πολιτισμού;

Μέθοδοι βακτηριολογικής έρευνας εισάγονται όλο και περισσότερο στην πράξη για μια πιο λεπτομερή εξέταση των ασθενών, καθιερώνοντας αιτιολογικός παράγοντας φλεγμονώδης διαδικασία, συνταγογραφώντας ορθολογική θεραπεία και προσδιορίζοντας την αποτελεσματικότητά της.

Ποικιλομορφία κλινικού υλικού και μοναδικότητα μικροχλωρίδας μεμονωμένα όργαναπροσδιορίζει τα χαρακτηριστικά των μεθόδων βακτηριολογικής έρευνας, που απαιτούν τη χρήση ειδικών τεχνικών δειγματοληψίας, τον εμβολιασμό σε θρεπτικά μέσα και την ανάλυση.

Η βακτηριολογική εξέταση του κλινικού υλικού αποτελείται από διάφορα στάδια:

Δειγματοληψία για έρευνα.

Σπορά σε θρεπτικά μέσα.

Απομόνωση καθαρού πολιτισμού;

Αναγνώριση και διαφοροποίηση απομονωμένων καλλιεργειών μικροοργανισμών.

Ανάλυση των αποτελεσμάτων της έρευνας.

Κατά τη διάρκεια μιας βακτηριολογικής μελέτης, η λεγόμενη σπορά του υλικού που συλλέγεται από τον ασθενή πραγματοποιείται σε θρεπτικά μέσα, τα οποία προάγουν την ανάπτυξη και την αναπαραγωγή του αιτιολογικού παράγοντα της νόσου. Κατά τη διάρκεια της μελέτης, είναι δυνατό να εντοπιστεί όχι μόνο το γεγονός της παρουσίας, αλλά και η συγκέντρωση παθογόνων μικροοργανισμών σε ένα συγκεκριμένο βιοϋλικό.
Η μέθοδος της βακτηριολογικής εξέτασης εξετάζει τα πτύελα, το εγκεφαλονωτιαίο υγρό, το αίμα, καθώς και τις εκκρίσεις από τα γεννητικά όργανα, στοματική κοιλότητα, φάρυγγα και τραύματα του ασθενούς. Έτσι, μικροοργανισμοί μπορούν να σπαρθούν από σχεδόν οποιοδήποτε μέρος του ανθρώπινου σώματος.
Η τεχνική της βακτηριολογικής καλλιέργειας είναι εξαιρετικά βολική και αποτελεσματική για την ανίχνευση και τον προσδιορισμό του τύπου βακτηρίων και μυκήτων. Η ανίχνευση των ιών παρουσιάζει κάποια δυσκολία λόγω των ιδιαιτεροτήτων της βιολογίας τους.
Η βακτηριολογική εξέταση (καλλιέργεια) έχει μεγάλη σημασία όχι μόνο για τον προσδιορισμό του συγκεκριμένου τύπου μικροοργανισμού, αλλά και για τον προσδιορισμό του βαθμού ευαισθησίας ενός συγκεκριμένου αντιβιοτικού σε αυτόν. Έτσι, προσδιορίζεται η μέγιστη αποτελεσματικότητα ενός συγκεκριμένου τύπου αντιβιοτικής θεραπείας.
Κατά τη διεξαγωγή μιας ανάλυσης, είναι σημαντικό να θυμάστε ότι ορισμένοι μικροοργανισμοί, όπως οι πνευμονιόκοκκοι, πεθαίνουν αρκετά γρήγορα επειδή έχουν αυξημένη τάση αυτοκαταστροφής. Έτσι, οι καλλιέργειες πρέπει να γίνονται σε σύντομο χρονικό διάστημα.

Η μέθοδος πολιτιστικής (βακτηριολογικής) έρευνας είναι ένα σύνολο μεθόδων που στοχεύουν στην απομόνωση και τον εντοπισμό καθαρών καλλιεργειών μικροοργανισμών (βακτηρίων) χρησιμοποιώντας καλλιέργεια σε θρεπτικά μέσα.

Η καθαρή καλλιέργεια είναι μια συλλογή μικροοργανισμών του ίδιου είδους. Τις περισσότερες φορές, μια καθαρή καλλιέργεια λαμβάνεται με την επιλογή και την καλλιέργεια μιας απομονωμένης αποικίας (του απογόνου ενός μόνο μικροβιακού κυττάρου).

Στάδια της μεθόδου:

1. Συλλογή υλικού για έρευνα.

2. Απομόνωση καθαρού πολιτισμού και ταύτισή του.

3. Συμπέρασμα.

Συλλογή υλικού για έρευνα.Ο τύπος του υλικού που μελετάται εξαρτάται από τον σκοπό της μελέτης (διάγνωση - από τον ασθενή, επιδημιολογική ανάλυση - από το εξωτερικό περιβάλλον, τροφή, ασθενή και (ή) φορέα βακτηρίων).

Απομόνωση καθαρού πολιτισμού. Περιλαμβάνει 3 ή 4 στάδια:

1. Εμβολιασμός του υλικού (μετά από προκαταρκτική μικροσκοπία) σε τρυβλίο με στερεό θρεπτικό μέσο (κατά προτίμηση διαφορικό διαγνωστικό ή επιλεκτικό) προκειμένου να ληφθούν μεμονωμένες αποικίες. Τις περισσότερες φορές παράγεται με μηχανικό διαχωρισμό. Σε ορισμένες περιπτώσεις (για παράδειγμα, αίμα), το υλικό προ-ενοφθαλμίζεται σε υγρό μέσο εμπλουτισμού και στη συνέχεια μεταφέρεται σε πλάκα με μέσο άγαρ. Μερικές φορές, πριν από τη σπορά, πραγματοποιείται εκλεκτική επεξεργασία του υλικού (λαμβάνοντας υπόψη τις ιδιότητες του απομονωμένου μικροοργανισμού, για παράδειγμα, επεξεργασία με οξύ ή αλκάλιο για την απομόνωση ανθεκτικών βακτηρίων). Καλλιεργείται σε θερμοκρασία 37°C για 18-24 ώρες. Χρόνος καλλιέργειας για διαφορετικών τύπωντα βακτήρια ενδέχεται να παρουσιάζουν διακυμάνσεις.

2(3):α) μελέτη αποικιών σε πλάκα άγαρ (πολιτιστικά χαρακτηριστικά), επιλογή των πιο τυπικών. β) προετοιμασία επιχρισμάτων από αυτές τις αποικίες με χρώση (Gram ή άλλες μεθόδους). α) διαλογή της υπόλοιπης αποικίας που μελετήθηκε σε ένα μέσο συσσώρευσης και ανάπτυξή της σε θερμοστάτη στη βέλτιστη θερμοκρασία.

3(4). Μελέτη της καθαρότητας της καλλιέργειας που λαμβάνεται στο μέσο συσσώρευσης. Με αυτό

παρασκευάζεται ένα επίχρισμα, βάφεται (συνήθως με χρώση Gram) και εξετάζεται μικροσκοπικά

μορφολογική και χρωματική ομοιογένεια (σε διαφορετικά οπτικά πεδία).

4(5). Ταυτοποίηση καθαρού πολιτισμού.

Σύναψη.Με βάση το σύνολο των χαρακτηριστικών σε σύγκριση με τις ιδιότητες των στελεχών αναφοράς (τύπου), υποδεικνύεται ο τύπος του μικροοργανισμού που απομονώθηκε από το υλικό.

Αξιολόγηση μεθόδου:

φόντα:σχετικά υψηλή ευαισθησία και ακρίβεια, ικανότητα προσδιορισμού του αριθμού των μικροβίων στο υλικό δοκιμής, καθώς και ευαισθησία στα αντιβιοτικά. ελαττώματα:σχετική διάρκεια, η μέθοδος είναι ακριβή.

21. Θρεπτικά μέσα για αερόβια και αναερόβια. Απαιτήσεις για θρεπτικά μέσα, ταξινόμηση.

Απαιτήσεις:

Τα μέσα πρέπει να είναι θρεπτικά

πρέπει να έχει ορισμένο pH

πρέπει να είναι ισοτονική, δηλ.

Η οσμωτική πίεση στο περιβάλλον πρέπει να είναι ίδια με αυτή του κυττάρου.

πρέπει να είναι υγρό και όχι πολύ ρευστό

πρέπει να έχει ένα ορισμένο δυναμικό οξειδοαναγωγής

πρέπει να είναι αποστειρωμένο

πρέπει να είναι ενιαία, δηλ.

περιέχουν σταθερές ποσότητες μεμονωμένων συστατικών.

Τα θρεπτικά μέσα μπορούν να χωριστούν:

Α) Κατά προέλευση:

1) φυσικά - φυσικά προϊόντα διατροφής (κρέας, γάλα, πατάτες).

2) τεχνητό - παρασκευασμένο ειδικά για την ανάπτυξη μικροβίων: - μέσα από φυσικά προϊόντα (νερό κρέατος, ζωμός με εκχύλισμα κρέατος (MPB), άγαρ με εκχύλισμα κρέατος (MPA), - χωρίς σταθερή σύνθεση, - συνθετικά θρεπτικά μέσα - διαλύματα αυστηρά καθορισμένες ποσότητες αλάτων, αμινοξέων, αζωτούχων βάσεων, βιταμινών σε απεσταγμένο νερό - έχουν σταθερή σύνθεση, χρησιμοποιούνται για την ανάπτυξη μικροοργανισμών και κυτταροκαλλιέργειες για τη λήψη εμβολίων, ορών ανοσοποιητικού και αντιβιοτικών.

Β) Κατά σκοπό:

1) γενικής χρήσης (MPB, MPA) - τα περισσότερα μικρόβια αναπτύσσονται πάνω τους.

Επιπλέον, ανάλογα με σκοπούς χρήσηςΣτο σχήμα για την απομόνωση καθαρών καλλιεργειών, τα ακόλουθα μέσα μπορούν να διακριθούν ανάλογα με το σκοπό:

1) εμπλουτισμός - καταστέλλει την ανάπτυξη μικροβίων που συνοδεύουν το παθογόνο.

2) να αποκτήσετε απομονωμένες αποικίες.

3) συσσώρευση καθαρού πολιτισμού.

Β) Κατά συνέπεια:

1) υγρό?

2) ημι-υγρό (με την προσθήκη άγαρ-άγαρ σε συγκέντρωση 0,5-0,7%).

3) πυκνό - πάνω από 1%.

Βακτηριολογική μέθοδος έρευνας (BLMI)– μέθοδος που βασίζεται στην απομόνωση καθαρών καλλιεργειών βακτηρίων με χρήση καλλιέργειας σε θρεπτικά μέσα και την ταυτοποίησή τους σε είδη που βασίζεται στη μελέτη μορφολογικών, πολιτισμικών, βιοχημικών, γενετικών, ορολογικών, βιολογικών, περιβαλλοντικών χαρακτηριστικών μικροοργανισμών.

Η βακτηριολογική διάγνωση των λοιμώξεων πραγματοποιείται με τη χρήση τυπικών διαγνωστικών σχημάτων εγκεκριμένων από το Υπουργείο Υγείας.

Καθαρός πολιτισμός -βακτήρια ενός είδους που αναπτύσσονται σε θρεπτικό υπόστρωμα, οι ιδιότητες των οποίων είναι υπό μελέτη.

Ενταση– ταυτοποιημένη καθαρή καλλιέργεια μικροοργανισμών ενός είδους, που απομονώνονται από μια συγκεκριμένη πηγή σε μια συγκεκριμένη χρονική στιγμή. Τα στελέχη του ίδιου είδους μπορεί να διαφέρουν ασήμαντα ως προς τις βιοχημικές, γενετικές, ορολογικές, βιολογικές και άλλες ιδιότητες, καθώς και ως προς τον τόπο και τον χρόνο απομόνωσης.

Στόχοι BLMI:

1. Κάνοντας αιτιολογική διάγνωση: απομόνωση καθαρής καλλιέργειας μικροοργανισμών και ταυτοποίησή της.

2. Προσδιορισμός πρόσθετων ιδιοτήτων, για παράδειγμα, η ευαισθησία ενός μικροοργανισμού σε αντιβιοτικά και βακτηριοφάγους.

3. Προσδιορισμός του αριθμού των μικροοργανισμών (σημαντικοί στη διάγνωση λοιμώξεων που προκαλούνται από UPM).

4. Τυποποίηση μικροοργανισμών, δηλ. προσδιορισμός ενδοειδικών διαφορών βάσει μελέτης γενετικήΚαι επιδημιολογικά(φαγοβάρες και ορόβαροι) μαρκαδόροι.Χρησιμοποιείται για επιδημιολογικούς σκοπούς, καθώς καθιστά δυνατό τον προσδιορισμό της κοινότητας των μικροοργανισμών που απομονώνονται από διαφορετικούς ασθενείς και από διαφορετικά περιβαλλοντικά αντικείμενα σε διαφορετικά νοσοκομεία και γεωγραφικές περιοχές.

Το BLMI περιλαμβάνει διάφορα στάδια,διαφορετικό για αερόβια, προαιρετικά αναερόβια και υποχρεωτικά αναερόβια.

I. Στάδια BLMI στην απομόνωση μιας καθαρής καλλιέργειας αερόβιων και προαιρετικών αναερόβιων.

Στάδιο.

Α. Συλλογή, μεταφορά, αποθήκευση, προεπεξεργασία υλικού.Μερικές φορές, πριν από τη σπορά, πραγματοποιείται επιλεκτική επεξεργασία του υλικού, λαμβάνοντας υπόψη τις ιδιότητες του απομονωμένου μικροοργανισμού. Για παράδειγμα, πριν από την εξέταση των πτυέλων ή άλλου υλικού για την παρουσία οξινοβακτηριδίου Mycobacterium tuberculosis, το υλικό υποβάλλεται σε επεξεργασία με διαλύματα οξέων ή αλκαλίων.

Β. Σπορά σε μέσο εμπλουτισμού(εάν είναι απαραίτητο, πραγματοποιείται εάν το υλικό δοκιμής περιέχει μικρό αριθμό βακτηρίων, για παράδειγμα, κατά την απομόνωση μιας καλλιέργειας αίματος). Για να γίνει αυτό, αίμα που λαμβάνεται στο ύψος του πυρετού σε μεγάλο όγκο (8–10 ml σε ενήλικες, 4–5 ml σε παιδιά) εμβολιάζεται στο μέσο σε αναλογία 1:10 (για να ξεπεραστεί η επίδραση του βακτηριοκτόνου αίματος παράγοντες)· η καλλιέργεια επωάζεται σε θερμοκρασία 37 0 C για 18-24 ώρες.

Β. Μικροσκοπία του υπό μελέτη υλικού.Παρασκευάζεται επίχρισμα από το υλικό που εξετάζεται, χρωματίζεται με Gram ή άλλη μέθοδο και εξετάζεται σε μικροσκόπιο. Αξιολογείται η υπάρχουσα μικροχλωρίδα και η ποσότητα της. Περαιτέρω μελέτες θα πρέπει να απομονώσουν τους μικροοργανισμούς που υπάρχουν στο αρχικό επίχρισμα.

Δ. Σπορά σε θρεπτικά μέσα για τη λήψη απομονωμένων αποικιών.Το υλικό ενοφθαλμίζεται με θηλιά ή σπάτουλα με τη μέθοδο του μηχανικού διαχωρισμού σε τρυβλίο με διαφορικό διαγνωστικό ή επιλεκτικό μέσο προκειμένου να ληφθούν απομονωμένες αποικίες. Μετά τη σπορά, το κύπελλο αναποδογυρίζεται (για να αποφευχθεί η επάλειψη των αποικιών με σταγονίδια υγρού συμπύκνωσης), επισημαίνεται και τοποθετείται σε θερμοστάτη σε θερμοκρασία 37 0 C για 18-24 ώρες.

Θα πρέπει να θυμόμαστε ότι κατά τη σπορά και την επανασπορά μικροβιακών καλλιεργειών, η προσοχή του εργαζομένου θα πρέπει να δίνεται στην τήρηση των κανόνων ασηψίας για την αποφυγή μόλυνσης των θρεπτικών μέσων και την πρόληψη μόλυνσης άλλων και αυτομόλυνσης!

Στην περίπτωση λοιμώξεων που προκαλούνται από ευκαιριακούς μικροοργανισμούς, όπου ο αριθμός των μικροοργανισμών που υπάρχουν στο παθολογικό υλικό είναι σημαντικός, γίνεται ποσοτική σπορά του υλικού, για την οποία μια σειρά 100πλάσιων αραιώσεων του υλικού (συνήθως 3 αραιώσεις) σε Παρασκευάζεται πρώτα αποστειρωμένο ισοτονικό διάλυμα χλωριούχου νατρίου σε δοκιμαστικούς σωλήνες. Μετά από αυτό, 50 μl από κάθε αραίωση σπέρνονται σε θρεπτικά μέσα σε τρυβλία Petri.

Στάδιο.

Α. Μελέτη μορφοτύπων αποικιών σε μέσα, μικροσκοπία τους.Κοιτάζουν μέσα από τα πιάτα και σημειώνουν το βέλτιστο θρεπτικό μέσο, ​​τον ρυθμό ανάπτυξης και το πρότυπο ανάπτυξης των μικροοργανισμών. Επιλέξτε να σπουδάσετε απομονωμένες αποικίες που βρίσκονται κατά μήκος του εγκεφαλικού επεισοδίου, πιο κοντά στο κέντρο.Εάν αναπτυχθούν πολλοί τύποι αποικιών, ο καθένας εξετάζεται χωριστά. Τα σημάδια των αποικιών αξιολογούνται (Πίνακας 7). Εάν είναι απαραίτητο, τα πιάτα με καλλιέργειες προβάλλονται μέσω ενός μεγεθυντικού φακού ή χρησιμοποιώντας μικροσκόπιο με φακό χαμηλής μεγέθυνσης και στενό διάφραγμα. Μελετώνται οι χρωστικές ιδιότητες διαφορετικών μορφοτύπων αποικιών για αυτό, προετοιμάζεται ένα μέρος της υπό μελέτη αποικίας κηλίδα,βάφονται με Gram ή άλλες μεθόδους, μικροσκοπικά και προσδιορίζονται η μορφολογία και η καθαρότητα της καλλιέργειας, εάν είναι απαραίτητο κατά προσέγγιση RA σε γυαλίμε πολυσθενείς ορούς.

Β. Συσσώρευση καθαρού πολιτισμού.Για τη συσσώρευση μιας καθαρής καλλιέργειας, απομονωμένες αποικίες όλων των μορφοτύπων επανασπείρονται σε ξεχωριστούς σωλήνες με λοξό άγαρ ή κάποιο άλλο θρεπτικό μέσο και επωάζονται σε θερμοστάτη στους +37 0 C (αυτή η θερμοκρασία είναι η βέλτιστη για τους περισσότερους μικροοργανισμούς, αλλά μπορεί να είναι διαφορετική, για παράδειγμα, για Campylobacterium spp.– +42 0 C, Candida spp. και Yersinia pestis– +25 0 C).

Το μέσο του Kligler χρησιμοποιείται συνήθως ως μέσο συσσώρευσης για εντεροβακτήρια.

Σύνθεση του μέσου του Kligler: MPA, 0,1% γλυκόζη, 1% λακτόζη, αντιδραστήριο υδρόθειου (θειικός σίδηρος + θειοθειικό νάτριο + θειώδες νάτριο), δείκτης ερυθρού φαινόλης. Το αρχικό χρώμα του μέσου είναι βυσσινί-κόκκινο, το μέσο είναι «λοξό» σε δοκιμαστικούς σωλήνες: έχει μια στήλη (2/3) και μια κεκλιμένη επιφάνεια (1/3).

Η σπορά στο μέσο του Kligler γίνεται με ραβδώσεις στην επιφάνεια και τρύπημα σε στήλη.

Στάδιο.

Α. Λογιστική της ανάπτυξης σε ένα μέσο συσσώρευσης, αξιολόγηση της καθαρότητας της καλλιέργειαςσε ένα επίχρισμα Gram πρότυπο ανάπτυξηςαπομονωμένη καθαρή κουλτούρα. Μια οπτικά καθαρή καλλιέργεια χαρακτηρίζεται από ομοιόμορφη ανάπτυξη. Στο μικροσκοπική εξέτασηΈνα κηλιδωμένο επίχρισμα που παρασκευάζεται από μια τέτοια καλλιέργεια αποκαλύπτει μορφολογικά και χρωματικά ομοιογενή κύτταρα σε διαφορετικά οπτικά πεδία. Ωστόσο, στην περίπτωση του έντονου πλειομορφισμού που είναι εγγενής σε ορισμένους τύπους βακτηρίων, κύτταρα με διαφορετική μορφολογία μπορούν να βρεθούν ταυτόχρονα σε επιχρίσματα από καθαρή καλλιέργεια.

Εάν το μέσο ένδειξης του Kligler χρησιμοποιήθηκε ως μέσο συσσώρευσης, τότε αξιολογούνται οι αλλαγές στο χρώμα του στη στήλη και το λοξό τμήμα, οι οποίες χρησιμοποιούνται για τον προσδιορισμό των βιοχημικών ιδιοτήτων: ζύμωση γλυκόζης, λακτόζης και παραγωγή υδρόθειου. Όταν η λακτόζη αποσυντίθεται, το λοξό τμήμα του μέσου γίνεται κίτρινο και όταν η γλυκόζη αποσυντίθεται, η στήλη γίνεται κίτρινη. Όταν σχηματίζεται CO 2 κατά την αποσύνθεση των σακχάρων, σχηματίζονται φυσαλίδες αερίου ή ρήξη στήλης. Στην περίπτωση παραγωγής υδρόθειου, παρατηρείται μαύρισμα κατά τη διάρκεια της οδού έγχυσης λόγω της μετατροπής του θειικού σιδήρου σε θειούχο σίδηρο.

Η φύση της αλλαγής χρώματος στο μέσο του Kligler (Εικ. 23) εξηγείται από την άνιση ένταση της διάσπασης αζωτούχων ουσιών από μικροοργανισμούς και το σχηματισμό αλκαλικών προϊόντων σε αερόβιες (σε κεκλιμένη επιφάνεια) και αναερόβιες (σε στήλη) συνθήκες .

Υπό αερόβιες συνθήκες, εμφανίζεται πιο έντονος σχηματισμός αλκαλίων στην λοξότμητη επιφάνεια παρά στη στήλη του μέσου. Επομένως, κατά τη διάρκεια της αποσύνθεσης της γλυκόζης, η οποία υπάρχει σε μικρή ποσότητα στο μέσο, ​​το οξύ που σχηματίζεται στην λοξότμητη επιφάνεια εξουδετερώνεται γρήγορα. Ταυτόχρονα, κατά την αποσύνθεση της λακτόζης, η οποία υπάρχει σε υψηλή συγκέντρωση στο μέσο, ​​τα αλκαλικά προϊόντα δεν είναι σε θέση να εξουδετερώσουν το οξύ.

Κάτω από αναερόβιες συνθήκες στη στήλη, σχηματίζονται αλκαλικά προϊόντα σε αμελητέες ποσότητες, επομένως εδώ ανιχνεύεται ζύμωση γλυκόζης.

Ρύζι. 23.Μέσο δείκτη Kligler:

1 – αρχικό,

2 – με ανάπτυξη E. coli,

3– με ανάπτυξη S. paratyphi B,

4 – με ανάπτυξη S. typhi

Ε. coliαποσυνθέτουν τη γλυκόζη και τη λακτόζη με σχηματισμό αερίου, δεν παράγουν υδρόθειο. Προκαλούν κιτρίνισμα της στήλης και του λοξότμητου τμήματος με σπασίματα στο μέσο.

Σ. παράτυπηαποσυνθέτουν τη γλυκόζη με σχηματισμό αερίου, αρνητική λακτόζη. Προκαλούν κιτρίνισμα της στήλης με σπασίματα το λοξότμητο μέρος δεν αλλάζει χρώμα και παραμένει κατακόκκινο. Συγχρόνως Σ. παράτυπη Βπαράγουν υδρόθειο (ένα μαύρο χρώμα εμφανίζεται καθώς προχωρά η έγχυση), Σ. παράτυπη Αυδρόθειο δεν παράγεται.

S. typhiαποσυνθέτουν τη γλυκόζη χωρίς σχηματισμό αερίου, είναι αρνητικά στη λακτόζη, παράγουν υδρόθειο. Προκαλούν το κίτρινο χρώμα της στήλης χωρίς σπασίματα, το λοξότμητο τμήμα δεν αλλάζει χρώμα και παραμένει κατακόκκινο και εμφανίζεται ένα μαύρο χρώμα καθώς προχωρά η έγχυση.

Shigella spp.θετικό στη γλυκόζη, αρνητικό στη λακτόζη, δεν παράγουν υδρόθειο. Προκαλούν το κίτρινο χρώμα της στήλης (με ή χωρίς σπασίματα, ανάλογα με τον ορό), το λοξότμητο μέρος δεν αλλάζει χρώμα και παραμένει κατακόκκινο.

Β. Τελική ταυτοποίηση καθαρού πολιτισμού(προσδιορισμός της συστηματικής θέσης του απομονωμένου μικροοργανισμού στο επίπεδο του είδους ή της παραλλαγής) και τον προσδιορισμό του φάσματος ευαισθησίας της απομονωμένης καλλιέργειας στα αντιβιοτικά.

Για τον προσδιορισμό μιας καθαρής καλλιέργειας, μελετώνται βιοχημικά, γενετικά, ορολογικά και βιολογικά χαρακτηριστικά σε αυτό το στάδιο (Πίνακας 8).

Στη συνήθη εργαστηριακή πρακτική, κατά την ταυτοποίηση δεν χρειάζεται να μελετηθούν όλες οι ιδιότητες. Χρησιμοποιήστε ενημερωτικό, προσβάσιμο, απλές δοκιμές, επαρκής για τον προσδιορισμό της ταυτότητας του είδους (παραλλαγή) του απομονωμένου μικροοργανισμού.

Η βακτηριολογική έρευνα είναι μια μελέτη που έχει σχεδιαστεί για να απομονώσει και να μελετήσει τις ιδιότητές τους προκειμένου να γίνει μια μικροβιολογική διάγνωση.

Το υλικό δοκιμής θα πρέπει να συλλέγεται υπό άσηπτες συνθήκες σε αποστειρωμένα δοχεία και να παραδίδεται στο εργαστήριο το συντομότερο δυνατό. Εάν είναι απαραίτητο, τα δείγματα πρέπει να φυλάσσονται στο ψυγείο. Η τεχνική δειγματοληψίας εξαρτάται από το αντικείμενο, τη φύση της νόσου και τις ιδιότητες του μικροοργανισμού. Μία από τις κοινές μεθόδους βακτηριολογικής έρευνας είναι η βακτηριοσκόπηση.

Για τη μελέτη μη στερεωμένων βακτηρίων, χρησιμοποιούνται δύο μέθοδοι: μια θρυμματισμένη σταγόνα (ανάμεσα στη διαφάνεια και το γυαλί καλύμματος) και . Θα πρέπει να θυμόμαστε ότι τα παρασκευάσματα μη σταθεροποιημένων βακτηρίων είναι μολυσματικά.

Για τη βακτηριοσκόπηση σταθερών σκευασμάτων χρησιμοποιούνται επιχρίσματα. Για την προετοιμασία τους, μια σταγόνα του υγρού δοκιμής κατανέμεται στην επιφάνεια μιας γυάλινης πλάκας και στη συνέχεια στεγνώνει. Η πιο κοινή μέθοδος στερέωσης του φαρμάκου είναι η διέλευση του μέσα από τη φλόγα ενός καυστήρα αερίου. Σε ορισμένες περιπτώσεις, χρησιμοποιούνται ενώσεις στερέωσης. Τα σταθερά παρασκευάσματα συνήθως χρωματίζονται (βλ. Χρώση μικροοργανισμών). Τα πιο σημαντικά στοιχεία της βακτηριολογικής έρευνας περιλαμβάνουν εμβολιασμούς και υποκαλλιέργειες που πραγματοποιούνται με βακτηριακό βρόχο ή πιπέτα Παστέρ. Η θηλιά αποστειρώνεται με ανόπτηση σε φλόγα και στη συνέχεια ψύχεται αγγίζοντας μια περιοχή μη εμβολιασμένου άγαρ ή με έκπλυση σε αποστειρωμένο υγρό. Όταν χρησιμοποιείτε μια πιπέτα Pasteur, κόψτε το άκρο με ένα τσιμπιδάκι, περάστε το σιφώνιο μέσα από τη φλόγα του καυστήρα αρκετές φορές και αφήστε το να κρυώσει. Κατά τη σπορά, χρησιμοποιούνται υγρά και στερεά θρεπτικά μέσα. Όταν σπαρθεί σε λοξό άγαρ, η βακτηριακή καλλιέργεια τρίβεται με ένα βρόχο στην επιφάνεια του άγαρ. Κατά τη σπορά στο πάχος μιας στήλης άγαρ ή ζελατίνης, το θρεπτικό μέσο τρυπάται στο κάτω μέρος του σωλήνα με μια θηλιά ή μια ειδική βελόνα. Κατά τη σπορά σε υγρό υπόστρωμα, πρέπει να λαμβάνεται μέριμνα ώστε το υγρό να μην χυθεί και να βρέξει τις άκρες των σωλήνων και των πωμάτων. Οι εμβολιασμοί και οι υποκαλλιέργειες πρέπει να πραγματοποιούνται κοντά στη φλόγα ενός καυστήρα αερίου, οι δοκιμαστικοί σωλήνες δεν πρέπει να παραμένουν ανοιχτοί για πολύ, ο βρόχος ή η πιπέτα Παστέρ με την καλλιέργεια δεν πρέπει να αγγίζουν τίποτα. Πριν κλείσετε τον δοκιμαστικό σωλήνα, οι άκρες πρέπει να καούν. Τα εμβολιασμένα σωληνάρια πρέπει να επισημαίνονται αμέσως.

Το πιο σημαντικό στάδιο της βακτηριολογικής έρευνας είναι η ταυτοποίηση - προσδιορισμός του είδους ή του είδους των βακτηρίων που λαμβάνονται με τη μορφή καθαρής καλλιέργειας. Κατά την αναγνώριση βακτηρίων, μελετώνται οι φυσιολογικές και βιοχημικές τους ιδιότητες και ο σχηματισμός τοξινών. Οι ορολογικές μέθοδοι αναγνώρισης βακτηρίων (αντιδράσεις και) χρησιμοποιούνται ευρέως. Σε πολλές περιπτώσεις, μια βιολογική μέθοδος για την αναγνώριση μικροοργανισμών είναι αποτελεσματική, που βασίζεται στη μόλυνση των εργαστηριακών ζώων με το υλικό που μελετάται ή την προκύπτουσα βακτηριακή καλλιέργεια και στον εντοπισμό χαρακτηριστικών παθολογικών αλλαγών στα ζώα.

Για την απομόνωση καθαρών καλλιεργειών χρησιμοποιούνται μηχανικές και βιολογικές μέθοδοι. Παράδειγμα μηχανικής μεθόδου: μια σταγόνα του υλικού δοκιμής αλέθεται με την ίδια στείρα σπάτουλα ή βακτηριακό βρόχο πάνω από την επιφάνεια ενός πυκνού θρεπτικού μέσου, διαδοχικά στο πρώτο, το δεύτερο και το τρίτο. Η απομόνωση μιας καθαρής καλλιέργειας γίνεται από αναπτυγμένες μεμονωμένες αποικίες και συνίσταται στην εξέταση και διαλογή τους σε ένα φρέσκο ​​θρεπτικό μέσο. Οι βιολογικές μέθοδοι για την απομόνωση καθαρών καλλιεργειών βασίζονται στο να λαμβάνεται υπόψη η μία ή η άλλη ιδιότητα του απομονωμένου μικροβίου, η οποία το διακρίνει από άλλα μικρόβια που βρίσκονται στο υπό μελέτη υλικό.

Η βιολογική μέθοδος χρησιμοποιεί αυτού του είδους τα θρεπτικά μέσα στα οποία δημιουργούνται συνθήκες που είναι ευνοϊκές για την ανάπτυξη ενός συγκεκριμένου τύπου μικροβίου. Οι βιολογικές μέθοδοι περιλαμβάνουν επίσης μόλυνση εργαστηριακών ζώων που είναι ευαίσθητα στα απομονωμένα είδη βακτηρίων.

Η βακτηριολογική έρευνα είναι ένα σύνολο μεθόδων για τον εντοπισμό παθογόνων μικροοργανισμών σε έναν ασθενή, έναν φορέα ή σε περιβαλλοντικά αντικείμενα. Οι βακτηριολογικές μελέτες χρησιμοποιούνται επίσης για την ανίχνευση ευκαιριακών και υγειονομικά ενδεικτικών μικροβίων που χαρακτηρίζουν τον βαθμό ρύπανσης του εξωτερικού περιβάλλοντος, για τη μελέτη του μικροβιακού τοπίου ενός συγκεκριμένου περιβάλλοντος (αντικειμένου). Η βακτηριολογική έρευνα μπορεί να χρησιμοποιηθεί για διάγνωση, πρόληψη μολυσματικές ασθένειες, για υγειονομικά και υγειονομικά χαρακτηριστικά του ανθρώπινου περιβάλλοντος, για επιστημονική έρευνα.

Το υλικό και η μέθοδος της βακτηριολογικής έρευνας εξαρτώνται από τον σκοπό της ανάλυσης, τις περιβαλλοντικές συνθήκες, την παθογένεια και την πορεία της νόσου. Εάν υπάρχει βακτηριαιμία, το μικρόβιο ανιχνεύεται με καλλιέργεια αίματος. Σε περιπτώσεις έντονων τοπικών βλαβών, το παθογόνο θα πρέπει να αναζητηθεί στην έκκριση ή τις εκκρίσεις του πάσχοντος οργάνου (διφθερίτιδα, δυσεντερία, γονόρροια κ.λπ.). Τέλος, σε ασθένειες με σύνθετη πορεία, όταν (όπως, για παράδειγμα, στον τυφοειδή πυρετό) η βακτηριαιμία αντικαθίσταται από βλάβες λεπτό έντερο, σε κάθε στάδιο, χρησιμοποιείται μια κατάλληλη μέθοδος έρευνας: κατά τη διάρκεια της πρώτης εβδομάδας της νόσου, πραγματοποιείται καλλιέργεια αίματος, στη δεύτερη, μια ορολογική εξέταση είναι η πιο αξιόπιστη, ξεκινώντας από την τρίτη εβδομάδα, λαμβάνεται ένα θετικό αποτέλεσμα καλλιέργεια των κοπράνων? Η τελευταία μέθοδος χρησιμοποιείται επίσης ως μελέτη ελέγχου για την ανίχνευση βακτηριακών φορέων μεταξύ των αναρρώντων και την παρακολούθηση τους.

Οποιαδήποτε από αυτές τις εργασίες εκτελείται χρησιμοποιώντας μεθόδους που έχουν σχεδιαστεί για την απομόνωση και τον προσδιορισμό μικροοργανισμών. Ανάλογα με τα χαρακτηριστικά του μικροβίου, χρησιμοποιείται όλο το σύνολο των μεθόδων ή μέρη του.

Η βακτηριοσκόπηση είναι η πιο προσιτή τεχνική, που βασίζεται στη μικροσκοπική εξέταση του υλικού. Κατά τη μικροσκόπηση φρέσκων παρασκευασμάτων, μπορείτε να χρησιμοποιήσετε ορισμένες μικροχημικές αντιδράσεις (για παράδειγμα, χρώση ιωδόφιλων βακτηρίων με διάλυμα Lugol) ή επιλεκτική χρώση διαφορετικών δομικών τμημάτων βακτηρίων.

Τα βακτήρια μπορούν να αναγνωριστούν με μεγαλύτερη σαφήνεια σε ένα έγχρωμο παρασκεύασμα. Το προς δοκιμή υλικό εφαρμόζεται σε μια γυάλινη πλάκα σε ένα λεπτό και όσο το δυνατόν πιο ομοιόμορφο στρώμα. Αφήστε το παρασκεύασμα να στεγνώσει στον αέρα και στερεώστε το χρησιμοποιώντας μία από τις γενικά αποδεκτές μεθόδους, αλλά πιο συχνά με φλαμπέ, δηλαδή περνώντας γρήγορα το παρασκεύασμα πάνω από τη φλόγα του καυστήρα δύο ή τρεις φορές, έτσι ώστε το ποτήρι να είναι ζεστό, αλλά όχι καυτό. Το παρασκεύασμα, που ψύχεται μετά τη στερέωση, βάφεται με απλή ή διαφορική χρώση (βλ. Χρώση μικροοργανισμών). Για τη μικροσκοπία φθορισμού, χρησιμοποιούνται τόσο φυσικά όσο και ξηρά παρασκευάσματα. Σε αυτή την περίπτωση, η επεξεργασία με ορισμένες χρωστικές προκαλεί τις δομές του μικροβιακού σώματος ή ολόκληρου του μικροβίου να λάμπουν σε υπεριώδεις ή μικρές μπλε ακτίνες. Σε μια άλλη τροποποίηση, τα μικρόβια αντιμετωπίζονται με συγκεκριμένους ορούς σημασμένους με φθορίζοντες (χρωστικές). Τα βακτήρια που ταιριάζουν με τον ορό θα λάμπουν καθώς ο επισημασμένος ορός εναποτίθεται πάνω τους. Τα ετερόλογα βακτήρια δεν θα λάμπουν.

Η μέθοδος βακτηριοσκόπησης χρησιμοποιείται ευρέως για τη βακτηριολογική διάγνωση ορισμένων μολυσματικών ασθενειών (γονόρροια, φυματίωση, υποτροπιάζον πυρετό), καθώς και για τη μελέτη ολόκληρου του συμπλέγματος μικροχλωρίδας ενός οργάνου (αμυγδαλές, κόλπος), προϊόντος ή άλλου αντικειμένου.

Η μέθοδος σποράς, δηλαδή η απομόνωση μιας καθαρής καλλιέργειας του επιθυμητού μικροοργανισμού, είναι μια πιο ακριβής και αξιόπιστη μέθοδος βακτηριολογικής διάγνωσης από τη βακτηριοσκόπηση. Φρέσκο ​​υλικό απλώνεται στην επιφάνεια ενός πυκνού θρεπτικού μέσου που χύνεται σε πιάτα Petri. Η αρχική σπορά πραγματοποιείται σε συνηθισμένα μέσα ευνοϊκά για ένα δεδομένο μικρόβιο, σε διαφορικά ή επιλεκτικά μέσα. Η επιλογή του θρεπτικού μέσου (βλ.), καθώς και η μέθοδος προεπεξεργασίας του νωπού υλικού για σπορά, εξαρτάται από τον βαθμό μόλυνσης του με τη συνοδό ξένη μικροχλωρίδα. Σε 24-48 ώρες. Διατηρούνται σε θερμοστάτη στη βέλτιστη θερμοκρασία για ένα δεδομένο μικρόβιο, τα κύπελλα εξετάζονται και ύποπτες αποικίες υποκαλλιεργούνται σε μέσα που προάγουν τον πολλαπλασιασμό αυτού του παθογόνου. Με αυτόν τον τρόπο προκύπτει καλλιέργεια ομοιογενών βακτηρίων, τα οποία πρέπει να ταυτοποιηθούν.

Η αναγνώριση ενός μικροβίου ξεκινά με τη μελέτη της μορφολογίας του σε ένα έγχρωμο παρασκεύασμα και σε μια θρυμματισμένη σταγόνα (βλ.) για να προσδιοριστεί το σχήμα των μικροβίων και η κινητικότητά τους. Το επόμενο βήμα είναι να μελετηθεί η ενζυματική ικανότητα των βακτηρίων να διασπούν υδατάνθρακες, αμινοξέα και ουρία σε συνδυασμούς ειδικούς για κάθε τύπο. Στα βακτήρια, η ζάχαρη και τα πρωτεολυτικά ένζυμα είναι τα πιο μελετημένα.

Η αναγνώριση ενός μικροβίου πρέπει να συμπληρώνεται από τη μελέτη άλλων ιδιοτήτων χαρακτηριστικών κάθε γένους και τύπου μικροοργανισμών. Αυτές οι ιδιότητες περιλαμβάνουν την ικανότητα επιλεκτικής διάλυσης ερυθρών αιμοσφαιρίων διαφορετικών ζώων (αιμόλυση), θρόμβωση πλάσματος αίματος (πήξη πλάσματος), διάλυση θρόμβου ινώδους (ινωδόλυση) κ.λπ. Όλα αυτά τα χαρακτηριστικά των βακτηρίων μπορούν να χρησιμοποιηθούν για τον προσδιορισμό τους ως διαφορικά χαρακτηριστικά .

Οριστική ταυτοποίηση μικροβίων ορισμένων ειδών κυρίως παθογόνα βακτήριαεντερική οικογένεια, περιλαμβάνει ορολογική ταυτοποίηση (βλ. Αναγνώριση μικροβίων). Συνήθως, για το σκοπό αυτό, πραγματοποιείται μια αντίδραση συγκόλλησης, δηλ. ανιχνεύεται ο συνωστισμός βακτηρίων υπό την επίδραση του ομώνυμου ανοσοποιητικού ορού. Η συγκόλληση μικροβίων στον ορό έναντι ενός συγκεκριμένου είδους υποδηλώνει συμμετοχή σε αυτό το είδος. Συνήθως, η αντίδραση συγκόλλησης πραγματοποιείται περίπου σε γυαλί και για τελικό προσδιορισμό σε δοκιμαστικούς σωλήνες με αραιώσεις ορού.

Ένας αριθμός μικροβίων δεν μπορεί να αναγνωριστεί πλήρως με τον τρόπο που περιγράφηκε. Στη συνέχεια, η ταυτοποίηση πρέπει να συμπληρωθεί με μόλυνση των πειραματόζωων, καθώς ορισμένα βακτήρια χαρακτηρίζονται από παθογένεια ή τοξικότητα, η οποία αποκαλύπτεται όταν τα ζώα μολύνονται. Σε ορισμένες περιπτώσεις, η μόλυνση των ζώων χρησιμεύει επίσης ως μέθοδος για τη συσσώρευση παθογόνων μικροβίων.

Μόνο μια σύγκριση όλων των χαρακτηριστικών μιας καλλιέργειας, που συλλέγονται κατά τη μελέτη της μορφολογίας, των βιοχημικών, ορολογικών και, όπου είναι απαραίτητο, των βιολογικών ιδιοτήτων της, μπορεί να παράσχει λόγους για ταυτοποίηση. Η απάντηση σε ένα θετικό αποτέλεσμα της δοκιμής δεν είναι δύσκολη εάν το απομονωμένο μικρόβιο είναι τυπικό. Σε αυτήν την περίπτωση, αναφέρετε το γένος, το είδος και, εάν προσδιορίζεται, τον τύπο του βακτηρίου. Όταν απομονώνεται ένα μικρόβιο που αποκλίνει σε ορισμένες ιδιότητες από το τυπικό χαρακτηριστικό, δίνεται μια απάντηση που υποδεικνύει το αποκλίνον χαρακτηριστικό. Σε αυτή την περίπτωση, είναι χρήσιμο να επαναληφθεί η μελέτη εάν το επιτρέπουν η πορεία της νόσου ή οι συνθήκες συλλογής υλικού. Είναι επίσης χρήσιμο να υποβληθεί η καλλιέργεια άτυπων μικροβίων σε πρόσθετη μελέτη χρησιμοποιώντας άλλες, πιο πολύπλοκες μεθόδους.

Τα αρνητικά αποτελέσματα μιας βακτηριολογικής μελέτης είναι σχετικής σημασίας και δείχνουν μόνο ότι το εξεταζόμενο τμήμα του υλικού δεν περιείχε τα απαιτούμενα μικρόβια ή ήταν μη βιώσιμο. Ωστόσο, μπορεί να υπάρχουν σε άλλο τμήμα. Για το λόγο αυτό, για παράδειγμα, κατά την εξέταση για μεταφορά βακίλλων (τύφος, δυσεντερία, διφθερίτιδα), απαιτούνται επαναλαμβανόμενες μελέτες.

9971 0

Η χρήση της βακτηριολογικής μεθόδου καθιστά δυνατή την απομόνωση του παθογόνου σε καθαρή καλλιέργεια από υλικό που λαμβάνεται από τον ασθενή και την ταυτοποίησή του με βάση τη μελέτη ενός συνόλου ιδιοτήτων. Τα περισσότερα βακτήρια είναι ικανά να καλλιεργηθούν σε διάφορα τεχνητά θρεπτικά μέσα (εκτός από τα χλαμύδια και τη ρικέτσια), επομένως η βακτηριολογική μέθοδος είναι σημαντική στη διάγνωση πολλών μολυσματικών ασθενειών.

Εάν επιτευχθεί θετικό αποτέλεσμα, η βακτηριολογική μέθοδος καθιστά δυνατό τον προσδιορισμό της ευαισθησίας του απομονωμένου παθογόνου σε αντιμικροβιακά φάρμακα. Ωστόσο, η αποτελεσματικότητα αυτής της μελέτης εξαρτάται από πολλές παραμέτρους, ιδίως από συνθήκες συλλογής υλικούκαι αυτός μεταφοράστο εργαστήριο.

ΝΑ βασικές απαιτήσειςΟι απαιτήσεις για την επιλογή και τη μεταφορά υλικού για βακτηριολογική έρευνα περιλαμβάνουν:

• λήψη υλικού πριν από την έναρξη της ετιοτροπικής θεραπείας.
• συμμόρφωση με αποστειρωμένες συνθήκες κατά τη συλλογή υλικού.
• τεχνική ορθότητα συλλογής υλικού·
• επαρκής ποσότητα υλικού.
• εξασφάλιση συνθηκών θερμοκρασίας για την αποθήκευση και τη μεταφορά υλικού.
• ελαχιστοποίηση του χρονικού διαστήματος μεταξύ συλλογής υλικού και σποράς σε στερεά θρεπτικά μέσα.

Η μεταφορά του υλικού στο εργαστήριο θα πρέπει να πραγματοποιείται αμέσως εάν είναι δυνατόν, αλλά όχι περισσότερο από 1-2 ώρες μετά τη συλλογή του. Τα δείγματα υλικών πρέπει να διατηρούνται σε συγκεκριμένη θερμοκρασία. Συγκεκριμένα, κανονικά αποστειρωμένα υλικά (αίμα, εγκεφαλονωτιαίο υγρό) αποθηκεύονται και παραδίδονται στο εργαστήριο στους 37 °C. Μη αποστειρωμένα υλικά (ούρα, εκκρίσεις αναπνευστική οδόςκ.λπ.) αποθηκεύονται σε θερμοκρασία δωματίου για όχι περισσότερο από 1-2 ώρες ή όχι περισσότερο από μία ημέρα στους 4 °C (συνθήκες οικιακού ψυγείου). Εάν είναι αδύνατη η παράδοση δειγμάτων στο εργαστήριο εντός του ρυθμισμένου χρονικού πλαισίου, συνιστάται η χρήση μέσων μεταφοράς που έχουν σχεδιαστεί για τη διατήρηση της βιωσιμότητας των παθογόνων σε συνθήκες συντήρησης.

Αίμα για έρευναπρέπει να λαμβάνεται από τον ασθενή κατά την περίοδο της αύξησης της θερμοκρασίας του σώματος, στην αρχή της έναρξης του πυρετού. Συνιστάται η εξέταση 3-4 δειγμάτων αίματος που λαμβάνονται σε μεσοδιαστήματα 4-6 ωρών, γεγονός που δικαιολογείται από την άποψη της μείωσης του κινδύνου παροδικής βακτηριαιμίας «έλλειψης» και της αύξησης της ικανότητας επιβεβαίωσης του αιτιολογικού ρόλου της απομονωμένης ευκαιριακής μικροχλωρίδας από το αίμα εάν αυτή η μικροχλωρίδα ανιχνευθεί σε πολλά δείγματα φλεβικό αίμα. Δείγμα αίματος σε ποσότητα 10 ml για ενήλικα και 5 ml για παιδιά εμβολιάζεται σε τουλάχιστον δύο φιάλες με μέσο για αερόβιους και αναερόβιους μικροοργανισμούς σε αναλογία 1:10. Συνιστάται μια μόνο μελέτη αρτηριακού αίματος.

Παίρνω εγκεφαλονωτιαίο υγρό(ΕΝΥ) παράγεται από γιατρό όταν οσφυονωτιαία παρακέντησησε ποσότητα 1-2 ml σε στεγνό αποστειρωμένο σωληνάριο. Το δείγμα παραδίδεται αμέσως στο εργαστήριο, όπου ξεκινά άμεσα και η εξέτασή του. Εάν αυτό δεν είναι δυνατό, το υλικό αποθηκεύεται στους 37 °C για αρκετές ώρες. Αυξάνει σημαντικά τον αριθμό των θετικών αποτελεσμάτων της βακτηριολογικής εξέτασης ενοφθαλμίζοντας 1-2 σταγόνες ΕΝΥ σε δοκιμαστικό σωλήνα που περιέχει ημι-υγρό μέσο με γλυκόζη και σε τρυβλίο Petri με άγαρ «αίματος». Για να στείλετε το υλικό, χρησιμοποιήστε ισοθερμικά κουτιά, θερμαντικά μαξιλάρια, θερμοσυσκευές ή οποιαδήποτε άλλη συσκευασία όπου η θερμοκρασία διατηρείται στους 37 °C περίπου.

Περιττώματαγια βακτηριολογική εξέταση, λαμβάνονται 3-5 g με αποστειρωμένες ξύλινες σπάτουλες σε αποστειρωμένο δοχείο με στεγανό καπάκι. Η εξέταση του συλλεγόμενου υλικού θα πρέπει να ξεκινήσει το αργότερο 2 ώρες αργότερα. Κατά τη συλλογή των κοπράνων, θα πρέπει να προσπαθήσετε να στείλετε παθολογικές ακαθαρσίες (βλέννα, πύον, επιθηλιακά σωματίδια κ.λπ.) για εξέταση, εάν υπάρχουν, αποφεύγοντας την εισαγωγή ακαθαρσιών αίματος, που έχουν βακτηριοκτόνες ιδιότητες, στο υλικό.

Μπορούν να χρησιμοποιηθούν επιχρίσματα ορθού (με βαμβακερή άκρη) για τη συλλογή υλικού. Το στυλεό θα πρέπει να υγραίνεται με αποστειρωμένο ισοτονικό διάλυμα χλωριούχου νατρίου ή μέσο μεταφοράς (αλλά όχι γέλη λαδιού). Γίνεται έγχυση ανά ορθό σε βάθος 5-6 cm και, γυρίζοντας το ταμπόν, αφαιρείται προσεκτικά, παρακολουθώντας την εμφάνιση του χρώματος των κοπράνων στο ταμπόν. Το στυλεό τοποθετείται σε στεγνό δοκιμαστικό σωλήνα εάν η μελέτη του υλικού ξεκινήσει εντός 2 ωρών, διαφορετικά - σε μέσο μεταφοράς.

τσαντίζομαι(μέση μερίδα ελεύθερα απελευθερωμένων ούρων) σε ποσότητα 3-5 ml συλλέγεται σε αποστειρωμένο δοχείο μετά από σχολαστική τουαλέτα των εξωτερικών γεννητικών οργάνων. Είναι προτιμότερο να συλλέγονται τα ούρα το πρωί.

Χολήσυλλέγονται κατά τη διάρκεια της διασωλήνωσης του δωδεκαδακτύλου στο δωμάτιο θεραπείας χωριστά σε τμήματα Α, Β και Γ σε τρεις αποστειρωμένους σωλήνες, τηρώντας τους κανόνες της ασηψίας.

Νερό γαστρικής πλύσηςσυλλέγονται σε αποστειρωμένα βάζα σε ποσότητες 20-50 ml. Θα πρέπει να ληφθεί υπόψη ότι η πλύση στομάχου σε αυτές τις περιπτώσεις πραγματοποιείται μόνο με αδιάφορα (που δεν έχουν βακτηριοστατική ή βακτηριοκτόνο δράση στους μικροοργανισμούς) διαλύματα - είναι καλύτερα βραστό νερό(χωρίς προσθήκη σόδας, υπερμαγγανικού καλίου κ.λπ.).

Πτύελο. Τα πρωινά πτύελα που απελευθερώνονται κατά τη διάρκεια μιας κρίσης βήχα συλλέγονται σε ένα αποστειρωμένο βάζο. Πριν από το βήχα, ο ασθενής βουρτσίζει τα δόντια του και ξεπλένει το στόμα του με βρασμένο νερό για να αφαιρέσει μηχανικά τα υπολείμματα τροφής, το απολεπισμένο επιθήλιο και τη μικροχλωρίδα του στόματος.

Νερό βρογχικής πλύσης. Κατά τη βρογχοσκόπηση, εγχέεται όχι περισσότερο από 5 ml ισοτονικού διαλύματος χλωριούχου νατρίου, ακολουθούμενο από αναρρόφηση σε αποστειρωμένο σωλήνα.

Εκκρίσεις από τον φάρυγγα, το στόμα και τη μύτη. Το υλικό από τη στοματική κοιλότητα λαμβάνεται με άδειο στομάχι ή 2 ώρες μετά το γεύμα με ένα αποστειρωμένο βαμβάκι ή ένα κουτάλι από τον βλεννογόνο και τις προσβεβλημένες περιοχές του στις εισόδους των αγωγών των σιελογόνων αδένων, στην επιφάνεια της γλώσσας και από έλκη. Εάν υπάρχει φιλμ, αφαιρέστε το με αποστειρωμένο τσιμπιδάκι. Το υλικό από τη ρινική κοιλότητα λαμβάνεται με στεγνό αποστειρωμένο βαμβάκι, το οποίο εισάγεται βαθιά μέσα στη ρινική κοιλότητα. Το υλικό από το ρινοφάρυγγα λαμβάνεται με ένα αποστειρωμένο βαμβάκι οπίσθιου φάρυγγα, το οποίο εισάγεται προσεκτικά μέσω του ρινικού ανοίγματος στο ρινοφάρυγγα. Εάν ξεκινήσει ένας βήχας, το ταμπόν δεν αφαιρείται μέχρι να τελειώσει ο βήχας. Για τον έλεγχο της διφθερίτιδας, εξετάζονται μεμβράνες και βλέννα από τη μύτη και το λαιμό ταυτόχρονα, λαμβάνοντας το υλικό με διαφορετικά επιχρίσματα.

Το υλικό δοκιμής ενοφθαλμίζεται σε στερεά θρεπτικά μέσα χρησιμοποιώντας ειδικές τεχνικές για να ληφθεί η ανάπτυξη μεμονωμένων αποικιών μικροοργανισμών, οι οποίοι στη συνέχεια ελέγχονται για να απομονωθεί μια καθαρή καλλιέργεια του παθογόνου.

Ορισμένοι τύποι βακτηρίων απομονώνονται χρησιμοποιώντας επιλεκτικά μέσα που αναστέλλουν την ανάπτυξη ξένων μικροοργανισμών ή περιέχουν ουσίες που διεγείρουν την ανάπτυξη ορισμένων παθογόνων μικροβίων.

Μικροοργανισμοί που απομονώνονται σε θρεπτικά μέσα αναγνωρίζω, δηλ. προσδιορίσει το είδος ή τον τύπο τους. ΣΕ πρόσφαταΓια την ταυτοποίηση στην πρακτική της υγειονομικής περίθαλψης, χρησιμοποιούνται συστήματα μικροδοκιμών, τα οποία είναι πάνελ με ένα σύνολο διαφορικών διαγνωστικών περιβαλλόντων, γεγονός που επιταχύνει την έρευνα. Τα συστήματα μικροδοκιμών χρησιμοποιούνται επίσης για τον προσδιορισμό της ευαισθησίας των μικροοργανισμών στα αντιμικροβιακά φάρμακα με αραίωση του αντιβιοτικού σε ένα υγρό θρεπτικό μέσο.

Κατά την αξιολόγηση των αποτελεσμάτων μιας βακτηριολογικής μελέτης, ο γιατρός πρέπει να λάβει υπόψη ότι ένα αρνητικό αποτέλεσμα δεν σημαίνει πάντα την απουσία παθογόνου και μπορεί να σχετίζεται με τη χρήση αντιμικροβιακών φαρμάκων, την υψηλή μικροκτόνο δράση του αίματος και τεχνικά λάθη. Ανίχνευση παθογόνου μικροβίου σε υλικό από ασθενή χωρίς σύνδεση με κλινική εικόναείναι δυνατό σε περίπτωση ανάρρωσης, υγιούς ή παροδικής βακτηριακής μεταφοράς.

Η απομόνωση από το αίμα, με την επιφύλαξη όλων των ασηπτικών κανόνων, ευκαιριακών μικροοργανισμών (staphylococcus epidermidis, Escherichia coli) και ακόμη και σαπρόφυτων θα πρέπει να θεωρείται εκδήλωση βακτηριαιμίας, ειδικά εάν αυτά τα μικρόβια βρίσκονται σε περισσότερα από ένα δείγματα υλικού ή σε διαφορετικά υποστρώματα. αίμα, ούρα), αφού Με τη μείωση της ανοσοαντιδραστικότητας του σώματος, αυτοί και άλλοι «μη παθογόνοι» μικροοργανισμοί μπορεί να είναι αιτιολογικοί παράγοντες μολυσματικών διεργασιών, συμπεριλαμβανομένης της σήψης.

Υπάρχει μια συγκεκριμένη δυσκολία ερμηνεία των αποτελεσμάτων της βακτηριολογικής εξέτασης μη αποστειρωμένων μέσων, δηλαδή, απόδειξη του αιτιολογικού ρόλου των ευκαιριακών μικροοργανισμών. Σε αυτήν την περίπτωση, λαμβάνονται υπόψη δείκτες όπως ο τύπος των απομονωμένων καλλιεργειών, ο αριθμός των μικροβιακών κυττάρων ενός δεδομένου τύπου στο υλικό, η επαναλαμβανόμενη απομόνωσή τους κατά τη διάρκεια της νόσου, η παρουσία μονοκαλλιέργειας ή σύνδεσης ενός μικροοργανισμού.

Yushchuk N.D., Vengerov Yu.Ya.